蛋白电泳时,为什么经浓缩胶压成一条线后,达到分离胶后会再次变宽?
在SDS-PAGE电泳过程中,蛋白质样品首先被加载到浓缩胶(或叫堆栈胶)上,然后穿越浓缩胶进入分离胶(或叫分辨胶)。这两种胶的作用和性质都不同:
1.浓缩胶(堆栈胶):
它的聚丙烯酰胺浓度较低,孔隙大小较大。蛋白在此胶中不是按分子量分离的,而是主要为了使所有的蛋白质集中到一个相对狭窄的区域,形成一个清晰的开始线。这有助于提高后续在分离胶中的分辨率。
2.分离胶(分辨胶):
它有较高的聚丙烯酰胺浓度,孔隙相对较小。当蛋白质从浓缩胶进入分离胶时,它们开始按照大小(分子量)分离。小的蛋白质在孔洞中移动得更快,而大的蛋白质移动得较慢。因此,经过分离胶后,原本在浓缩胶中被压缩为一条线的蛋白样品开始逐渐展宽,并形成不同大小的蛋白质带。
所以,蛋白质样品在浓缩胶中被集中后,在分离胶中由于大小的差异而被分离,导致在电泳图上显示为不同的条带。
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