体内泛素化实验与免疫共沉淀

蛋白质泛素化，或靶蛋白共价结合泛素，在细胞周期的运转中以及细胞内信号转导通路中发挥了至关重要的作用。

泛素介导的信号转导的多样性取决于目标蛋白可以通过多种方式被泛素修饰，在一个或多个位点的单泛素化，和通过几种可能键合的多泛素化。每一个泛素分子有七个可能的赖氨酸残基可用于泛素链的延伸；因此多泛素化的功用取决于泛素链延伸中所用的赖氨酸残基。而这是由特异的泛素结合酶或泛素连接酶确定的，泛素激活酶没有特异性。

检测体内泛素化蛋白最直接的方法是进行免疫沉淀实验，通过体内泛素化实验联合免疫共沉淀的检测方法，可识别特定赖氨酸残基的泛素化或确认特异的泛素结合酶/泛素连接酶是否在靶蛋白的修饰上发挥了作用。然后用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDS-PAGE）/免疫印迹进行表征并观察泛素化蛋白的特征，从而对蛋白质体内泛素化进行验证。

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