如何测定蛋白泛素化含量

    蛋白泛素化是指泛素(Ubiquitin)通过泛素化激活酶、结合酶、连接酶(E1-E2-E3)的级联反应连接到靶蛋白的赖氨酸残基上,其涉及8种不同的泛素链连接类型(M1、K6、K11、K27、K29、K33、K48和K63)。蛋白质泛素化在细胞周期、信号传导、蛋白降解等生理过程中发挥关键作用,通过测定蛋白泛素化含量可进一步了解生物体内蛋白泛素化修饰的生理功能及影响。

     

    在泛素化蛋白含量测定过程中,泛素化修饰的蛋白被胰蛋白酶消化为小片段肽链,在泛素化溪水肽链的赖氨酸的修饰位点上产生两个甘氨酸的残基(K-GG),采用赖氨酸泛素化抗体富集泛素化修饰肽链。富集得到的泛素化蛋白肽链使用基于质谱的非标记(Label-free)定量和标记(Label)定量技术测定蛋白泛素化含量,其中基于质谱的标记定量检测包括基于串级质谱报告离子定量的iTRAQ和TMT定量检测技术。

     

    百泰派克公司采用Thermo Fisher的Q ExactiveHF质谱平台,Orbitrap Fusion质谱平台,Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC技术,提供泛素化定量蛋白组分析服务技术包裹,您只需将样品寄出并将实验目的告诉我们,我们会负责项目后续所有事宜,包括蛋白提取、蛋白酶切、泛素化肽段富集、肽段分离、质谱分析、质谱原始数据分析、生物信息学分析。

     

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