百泰派克生物科技BTP客户案例：利用质谱技术鉴定染色质中存在的Cds1依赖性磷酸化蛋白质

期刊：Cell；影响因子: 59.9004

原文链接：DOI: 10.1016/j.cell.2012.04.030

研究对象：裂殖酵母Schizosaccharomyces pombe

研究目的：s期内检查点如何防止复制叉的逆转研究

研究手段：磷酸化位点质谱检测等

研究内容及结论：当复制叉在受损碱基处或核苷酸耗尽时停滞时，s期内检查点确保了它们的稳定并可以重新启动。在S内检查点缺陷的芽殖酵母中，复制叉停滞垮塌，约10%形成致病性鸡爪结构，导致不完全复制和细胞死亡（Lopes等，2001年；Sogo等，2002年；Tercero和Diffley，2001年）。利用裂殖酵母，该研究报道了Cds1Chk2效应激酶以Dna2的S220位点为靶点，在体内和体外调节Dna2与染色质中复制叉停滞的关联。该研究证明了Dna2-S220磷酸化和Dna2的核酸酶活性是防止复制叉逆转所必需的。与此相一致的是，Dna2可以有效地在模型复制叉上切割叉回归的专性前体-回归的前导链或滞后链。该研究认为，回归新生链的Dna2切割可以防止复制叉逆转，从而稳定停滞的复制叉，以在复制应激期间维持基因组的稳定性。

利用质谱技术对染色质中存在的Cds1依赖性磷酸化的蛋白质进行测定，该服务由北京百泰派克生物科技提供。结果显示，只有HU处理的cds1+细胞制备的Dna2在S220和S135上磷酸化，s220磷酸化肽的丰度是s135磷酸化肽的约8倍。

参考文献：Hu J, Sun L, Shen F, et al. The intra-S phase checkpoint targets Dna2 to prevent stalled replication forks from reversing[J]. Cell, 2012, 149(6): 1221-1232.

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