百泰派克生物科技BTP客户案例:利用质谱技术鉴定染色质中存在的Cds1依赖性磷酸化蛋白质
期刊 :Cell;影响因子: 59.9004
原文链接:DOI: 10.1016/j.cell.2012.04.030
研究对象:裂殖酵母Schizosaccharomyces pombe
研究目的:s期内检查点如何防止复制叉的逆转研究
研究手段:磷酸化位点质谱检测等
研究内容及结论:当复制叉在受损碱基处或核苷酸耗尽时停滞时,s期内检查点确保了它们的稳定并可以重新启动。在S内检查点缺陷的芽殖酵母中,复制叉停滞垮塌,约10%形成致病性鸡爪结构,导致不完全复制和细胞死亡(Lopes等,2001年;Sogo等,2002年;Tercero和Diffley,2001年)。利用裂殖酵母,该研究报道了Cds1Chk2效应激酶以Dna2的S220位点为靶点,在体内和体外调节Dna2与染色质中复制叉停滞的关联。该研究证明了Dna2-S220磷酸化和Dna2的核酸酶活性是防止复制叉逆转所必需的。与此相一致的是,Dna2可以有效地在模型复制叉上切割叉回归的专性前体-回归的前导链或滞后链。该研究认为,回归新生链的Dna2切割可以防止复制叉逆转,从而稳定停滞的复制叉,以在复制应激期间维持基因组的稳定性。
利用质谱技术对染色质中存在的Cds1依赖性磷酸化的蛋白质进行测定,该服务由北京百泰派克生物科技提供。结果显示,只有HU处理的cds1+细胞制备的Dna2在S220和S135上磷酸化,s220磷酸化肽的丰度是s135磷酸化肽的约8倍。
参考文献:Hu J, Sun L, Shen F, et al. The intra-S phase checkpoint targets Dna2 to prevent stalled replication forks from reversing[J]. Cell, 2012, 149(6): 1221-1232.
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