脂质组学鉴定技术

    脂质组学的概念是随着基因组学和蛋白质组学研究的兴起而提出的,由中国科学家韩贤林在2003年提出。脂质组学是对与生物体、组织或细胞相互作用的脂质和分子的综合系统分析和鉴定,旨在了解脂质的结构和功能,揭示脂质代谢与细胞、器官甚至机体的关系。它是一个研究生理和病理过程之间关系的学科。

     

    脂质是自然界中的一大类化合物,不溶于水,易溶于有机溶剂。它们在化学和结构上是异质的,主要包括脂肪酸及其天然存在的衍生物(如酯或胺),以及与其生物合成和功能相关的化合物。脂质可以参与多种生物代谢,如能量转换、物质运输、信息识别和传递、细胞发育和分化、细胞凋亡等。脂质代谢异常可导致各种人类疾病,包括糖尿病、肥胖症、癌症、神经退行性疾病等。脂质组学已广泛应用于药物发现、分子生理学、分子病理学、功能基因组学、营养学、环境、健康等重要领域。研究表明,哺乳动物体内大约有1000-2000种脂质,随着脂质研究技术的发展,各种新的脂质分子还在不断被发现。

     

    由于其种类繁多,美国国立卫生研究院(NIH)提出将脂质分为以下八类:脂肪酸、甘油脂、甘油磷脂、鞘脂、固醇脂、异戊烯醇脂、糖脂和聚酮类。

     

    脂质组学鉴定技术

     

    脂质代谢物结构复杂,按极性可分为极性脂类(如甘油磷脂、鞘脂)和非极性脂类(如甘油酯、胆固醇)。根据官能团、碳链长度、双键数等的差异,也可以在色谱图上分离不同的脂质。常用于鉴定脂质的技术包括Shotgun、GC-MS、LC-MS和HILIC-MS。

     

    Shotgun

     

    基于电喷雾电离质谱ESI-MS的“Shotgun法”是目前研究脂质组学的常用分析方法。脂质样品纯化后,直接进样,根据脂质分子在不同pH值下的电荷差进行分离,无需色谱柱分离。不同的脂质分子分别在正离子和负离子模式下检测。Shotgun法具有样品制备简单、样品消耗小、分析时间短的特点。缺点是分析低丰度脂质较困难。

     

    GC-MS

     

    大多数脂质小分子具有高挥发性。GC-MS可以有效地将脂质与其他大分子分离,然后通过质谱鉴定脂质小分子。然而,GC-MS对分析物挥发性和衍生化的要求,限制了其在脂质组学中的应用。

     

    LC-MS

     

    与GC-MS相比,LC-MS脂质分析对分析物没有挥发性要求,也不需要衍生化。它可以在保留脂质完整信息的同时,在色谱柱上实现良好的分离。它被广泛用于脂质组学分析。液相色谱流动相和柱型可分为正相液相色谱(NPLC)和反相液相色谱(RPLC)两种分离模式。

     

    HILIC-MS

     

    亲水作用液相色谱(HILIC)是一种新型的色谱分离模式,结合了RPLC和NPLC的优缺点,具有NPLC和RPLC之间的分离机制。HILIC采用非键合二氧化硅极性固定相和水溶性有机溶剂作为流动相,有利于极性脂质的分离,克服了NPLC和RPLC在极性脂质分离方面的不足。

     

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