基于质谱的肽和蛋白质从头测序

    基于质谱的肽和蛋白质从头测序方法

    从头测序是一种分析和鉴定肽序列和一些翻译后修饰的蛋白质的方法。与其他一些依赖于已知的蛋白质序列数据库或已知的质谱数据库的分析方法不同,从头测序利用串联质谱根据肽段的裂解特性直接进行分析。因此,未包括在蛋白质数据库中的肽序列、新物种的蛋白质序列和基因组未被测序的蛋白质序列都可以进行从头测序。采用该方法开发的软件有PepNovo、PEAKS、pNovo。

     

    基于质谱的肽和蛋白质从头测序基本原理

    在质谱分析中,待分析物质的粒子在通过电磁场之前首先被电离。由于不同质荷比的离子在电磁场中受到的作用力不同,其运动轨迹和飞行时间等分离检测离子的特征也不同。找到特定的裂解模式后,根据质谱峰之间的质量差和氨基酸的翻译后修饰情况,可以计算出相应的氨基酸信息。

     

    基于质谱的肽和蛋白质从头测序工作流程

    蛋白质/肽从头测序的工作流程如下:

    • 首先利用生化分离或亲和选择过程从样品组织中提取待分析的蛋白质。然后将该蛋白质用相关的酶(如胰蛋白酶)酶解成肽段;
    • 使用高效液相色谱分离和纯化肽消化产物;
    • 在进入离子源之前,再利用高压液相色谱分离和洗涤肽;
    • 肽通过离子源并转化为带高电荷的液滴。 脱水后进入质谱仪生成一级质谱;
    • 计算机生成肽的优先级列表;
    • 该多肽被选择用于下一轮的碎裂。通过串联质谱检测离子在电磁场中的运动可得到离子的质荷比;
    • 在质谱仪分析过程中,具有特定质量电荷比的多肽离子代表一定的质量;
    • 这种能量轰击裂解可以根据这些碎裂离子的质量电荷比信息来推断,通过排列组合可以推导出对应的多肽氨基酸残基,从而解析出与质谱图相对应的多肽序列;
    • 用软件来分析每个肽的二级质谱峰。拼接肽序列可获得蛋白质的全长序列。

     

    基于质谱的肽和蛋白质从头测序方法应用

    该技术可用于生物样品中未知多肽序列的分析和检测、末端残基缺失的多肽的检测、赖氨酸和亮氨酸的鉴定、N端封闭和环状蛋白质的鉴定、未知蛋白质或多肽序列信息的准确测定、商业修饰的蛋白质和酶序列的准确测定、稳定细胞系表达的蛋白质序列的准确测定以及抗体一级结构序列的克隆分析等。

     

    百泰派克生物科技-您身边的生物质谱专家

    北京百泰派克生物科技有限公司(Beijing Bio-Tech Pack Technology Company Ltd. 简称BTP)从事以生物质谱为依托的生物药物表征,大分子物质(包括蛋白质、多肽、代谢物)质谱分析以及小分子物质检测服务。公司采用ISO9001质量控制体系,专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务,业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等。7大质量控制检测平台,服务3000+企业,10000+客户的选择,致力于为您提供优质的生物质谱分析服务!

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