多肽药物N糖谱分析

多肽药物是由多个氨基酸通过肽键连接而成的生物活性分子，通常来说，它由10~100个氨基酸连接而成，相对分子质量低于10000。多肽药物大多来源于内源性肽或者天然肽，因此对人体没有副作用或者副作用很小。相比于蛋白类药物，多肽药物还具有稳定性好、纯度高、生产成本低、免疫原性低等优势，加上多肽合成技术的快速发展与成熟，使得多肽药物成为近些年生物药研发的焦点。目前，多肽药物已广泛应用于肿瘤治疗、自身免疫性疾病以及某些心血管疾病、糖尿病等的诊断和治疗，具有广阔的应用前景。

 

糖基化主要是指将聚糖连接到蛋白质、脂质或其他有机分子上的酶促过程，是最常见的蛋白质翻译后修饰（PTM）。由于连接的聚糖的复杂性和同量异位性质，糖基化分析十分具有挑战性。随着蛋白质治疗剂在临床实践中的应用增多，如单克隆抗体、糖蛋白、激素、细胞因子和凝血因子，蛋白质N-糖基化（也称作N聚糖，N糖）的检测受到越来越广泛的关注。

 

N糖（N-Glycan）是一种含有Man3-GlcNAc2的寡糖结构，它们通过末端N-乙酰基葡糖胺（GlcNAc）和天冬酰胺的NH2基团之间的糖苷键与蛋白质的多肽链连接。目前，N糖谱分析可利用MALDI TOF MS或UHPLC技术，对聚糖及其种类进行分析。

 



生物制品表征N糖谱分析示意图

 

MALDI-TOF对糖基化化合物的结构表征具有很高的灵敏度，且可实现高通量检测。基于LC-MS的N糖分析是现在的主流分析方法，亲水相互作用色谱法（HILIC）可用于N糖分析，PNGase F酶促反应释放的N糖，利用2-氨基苯甲酰胺（2-AB）对释放所得的糖链进行衍生化，对衍生后的糖链进行测定，可用于大量样本N糖的分析。在进行荧光标记之前，如果存在大量可能干扰衍生化反应的去污剂、非挥发性盐或带有游离氨基的物质，可通过TSK Amide-80色谱柱对N糖进行纯化。标记后的N糖通过HILIC-UHPLC MS进行分析。

 

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百泰派克生物科技多肽药物表征内容



 

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