蛋白分析FAQ汇总

• • 如果一个蛋白既有内质网中滞留信号又有进入线粒体信号序列，那么它最终会定位何处?

  当一个蛋白质同时具有内质网（ER）滞留信号和线粒体导向信号时，它的最终定位将取决于这些信号序列的相对强度和定位过程中的竞争机制。通常，以下因素会影响它的最终定位：

• • 目前研究蛋白质空间结构最主要的方法是什么？

  目前研究蛋白质空间结构的主要方法有X射线晶体学（X-ray Crystallography）、核磁共振（NMR）光谱学、冷冻电镜（Cryo-EM）、计算模拟与同源建模（Computational Modeling and Homology Modeling）和小角X射线散射（SAXS）。

• • 甲醛固定交联后测蛋白浓度，基本测不出来，是不是这一步需要去交联后才能测浓度？

  是的，甲醛固定交联后，蛋白质的结构和溶解性会发生改变，可能会影响蛋白浓度的测定。甲醛会在蛋白质分子之间形成共价交联键，使蛋白质形成不可溶的网状结构，这样的交联蛋白质很难被传统的蛋白质浓度测定方法（如BCA、Bradford等）检测到。因此，在甲醛交联后，如果要准确测定蛋白浓度，通常需要先进行

• • 在蛋白交联后,用碧云天试剂盒里的裂解液进行细胞裂解,但BCA法测定浓度很低,请问是什么原因呢？

  在蛋白交联后使用BCA法测定蛋白浓度时，如果得到的浓度很低，可能有几个原因：交联效果、试剂反应条件、裂解液的影响、样品稀释度、试剂盒的过期或保存不当。

• • 氨基酸连接构成的分子都是蛋白质吗

  氨基酸连接构成的分子大多数情况下被称为蛋白质，但并非所有氨基酸聚合物都被视为蛋白质。

• • 请问多肽组数据怎么看？

  谱检测多肽后，数据分析包括几个关键步骤：检查数据质量以评估多肽数目和信噪比；确认多肽鉴定结果的匹配置信度和修饰信息；进行定量分析以识别蛋白质表达变化；映射多肽数据到对应蛋白质并进行生物学功能分析；最后，通过数据可视化展示表达差异。

• • 请问用戊二醛交联的protocol是怎样的？

  戊二醛是一种常用的交联剂，广泛用于蛋白质、酶、细胞等生物样品的固定和交联。在戊二醛交联实验中，通常用于稳定蛋白质复合物或细胞结构，以下是一个常见的戊二醛交联的基本protocol（以细胞或蛋白为例），可根据实际实验需求进行调整。

• • 请问分子筛分离不同大小的活性蛋白时，这个筛是有成品吗？

  分子筛（也称为凝胶过滤或分子排阻层析）是一种常用的分离技术，主要用于根据分子大小分离蛋白质、核酸等生物大分子。在进行分子筛分离不同大小的活性蛋白时，筛是指用于分离的层析介质（通常是聚合物颗粒），这类介质是有成品可供选择的。

• • far-western跑出来的条带是白色的，请问这是为什么呀？要怎么解决呢？

  在Far-Western Blot实验中，条带出现白色通常与曝光过度、蛋白过量、抗体浓度过高、检测底物不均或膜转印不完全有关。为解决此问题，可以缩短曝光时间、减少样品蛋白和抗体的用量、确保底物均匀分布以及优化蛋白转移条件。这些调整有助于改善实验条带的显色效果。

• • 蛋白质降解的特性有哪些？

  蛋白质降解是一个非常关键的生物过程，其主要特性包括：选择性、时序性、空间性、可逆性、动态性、依赖性、特异性