有抗原样品想测pl值,或者在ph在7.4下的带电性,我担心其在运输过程中失活。请问应如何处理?
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避免纯水:使用纯水可能引起蛋白结构不稳定,建议溶于低离子强度、pH 7.4 的缓冲液(如PBS、HEPES等)。
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添加稳定剂:如适用于该抗原类型,可添加甘油(10–50%)、BSA(0.1–1%) 或 糖类(如蔗糖或海藻糖) 以增强稳定性。
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若反复冻融不可避免,建议分装单次使用量,避免冻融损伤;
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如抗原含有敏感结构域,考虑添加非离子型表面活性剂(如0.01% Triton X-100 或 Tween 20)减少冻融应激。
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建议使用 IEF(等电聚焦电泳) 或 Zeta电位仪;
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若有仪器条件,iCE(微流控等电聚焦) 可提供更高分辨率。
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可通过Zeta电位分析评估颗粒/分子表面的带电趋势;
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也可用 CEX/AEX 色谱保留行为 间接判断电荷性质,pH 7.4 下是否易结合至阳/阴离子交换柱为重要依据。
针对测定抗原样品的等电点(pI)或其在pH 7.4条件下的带电性,同时要避免运输过程中样品失活的问题,建议如下处理策略:
一、关于抗原样品在运输过程中的稳定性
1、温度控制:大多数蛋白类抗原在常温下易变性或降解,建议全程干冰运输(–78.5°C)或液氮保存(如为极不稳定的抗原),以确保其天然构象不被破坏。
2、缓冲液选择:
3、抗冻保护:
二、测定等电点或pH 7.4带电性时的建议
1、等电点测定方法:
2、pH 7.4 下的电荷特征:
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