基于PRM的血浆样本靶向蛋白定量分析
血浆是蛋白质组学研究中最具临床转化价值的样本类型之一，因其来源广泛、获取便捷且包含丰富的系统性生物学信息。然而，血浆中蛋白质浓度动态范围可达10^10级别，高丰度蛋白（如白蛋白、免疫球蛋白）占据总蛋白质质量的90%以上，使得低丰度蛋白质——尤其是潜在的疾病标志物——难以被准确识别。（Parallel Reaction Monitoring）PRM技术凭借其高选择性与灵敏度，已成为血浆中低丰度蛋白靶向定量分析的重要工具。本文将系统解析PRM在血浆样本靶向蛋白定量分析中的关键优势、技术路径。
一、血浆样本分析的技术挑战
1、高动态范围抑制效应：高丰度蛋白造成离子抑制，遮蔽低丰度靶标。
2、复杂背景干扰：血浆含有多种干扰成分（如脂类、小分子、糖蛋白），影响质谱分析稳定性。
3、重复性要求高：临床样本分析需具备极高的批次一致性与定量精度。
4、样本量受限：部分临床队列样本有限，需在微量条件下实现高质量定量。
二、PRM技术在血浆蛋白定量中的适用性
PRM是基于高分辨率质谱平台的靶向分析技术，适合少量、高复杂样本中的低丰度蛋白精确定量。
关键优势包括：
1、高分辨率 Orbitrap 扫描：有效区分背景离子与靶标离子，提升信噪比。
2、多碎片离子定量机制：自由选择响应最佳的离子峰进行定量，增强方法鲁棒性。
3、与稳定同位素内标协同应用：实现绝对定量与批间校正，满足临床样本分析需求。
三、血浆样本PRM分析的标准流程
1、样本预处理
（1）高丰度蛋白去除：常用的免疫亲和柱（如MARS）去除白蛋白/IgG。
（2）蛋白浓度标准化：BCA或Bradford法统一输入量。
（3）变性还原烷基化：促进酶解效率，提高肽段回收率。
2、酶解与内标添加
（1）使用Trypsin或Lys-C酶进行充分酶解。
（2）在酶解前添加SIL肽段，保证全过程校准能力。
3、肽段纯化与富集
（1）C18固相萃取去除盐和小分子干扰。
（2）可根据靶标浓度需求加入SISCAPA等亲和富集策略。
4、LC-PRM质谱分析
（1）高效液相色谱（NanoLC或μLC）实现分离。
（2）PRM模式参数优化：孤立窗口（1~2 Da）、NCE能量、注入时间等精调。
5、数据分析与质量控制
（1）使用Skyline进行碎片离子峰识别、积分与内标校正。
（2）设置QC样本、空白、反复注入控制系统稳定性。
百泰派克生物科技围绕临床样本蛋白质组应用场景，建立了高灵敏度、高标准化的血浆PRM定量平台。
特色优势包括：
1、专属肽段数据库：覆盖500+常见疾病相关蛋白靶标，支持快速方法开发。
2、高通量Orbitrap质谱平台：支持μg级别样本输入，灵敏度达低飞摩尔级。
3、自动化数据处理流程：Skyline+Python脚本实现高效率定量与批量质控。
4、富集与去除方案组合化：根据项目需求匹配高丰度蛋白去除、亲和富集、分级分离等策略。
血浆的蛋白质组信息具有高度的生物医学价值。PRM技术在精准识别与定量低丰度血浆蛋白方面展现出强大优势，特别适合用于标志物验证、药物研究及大队列临床项目中。百泰派克生物科技将继续推动靶向蛋白定量平台的发展，为客户提供高效、标准化、可重复的血浆蛋白质组解决方案。
百泰派克生物科技——生物制品表征，多组学生物质谱检测优质服务商
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