磷酸化位点的质谱检测实验原理

磷酸化是研究最为频繁的翻译后修饰之一，它能控制下游信号通路调节细胞增殖、存活和分化等过程。如今，基于质谱的磷酸化蛋白质组学是一种成熟的方法，可对磷酸化蛋白和复杂样品中的肽进行磷酸化表征和定量。在此之前，进一步了解磷酸化位点的质谱检测实验原理显得愈发重要。

质谱（mass spectrometry，MS）是一种分析技术，可产生包含材料样品的原子或分子质量的光谱。光谱用于确定样品的元素、同位素特征、颗粒和分子的质量，并阐明肽和其他化合物等分子的化学结构。在磷酸化蛋白质组的典型MS鉴定中，蛋白质样品被电离，并且样品离子根据其不同的质量和相对丰度进行分离。MS磷酸化的检测基于胰蛋白酶消化肽产生的实际检测质谱与其理论肽质量相匹配，若质量与电荷之间的质量偏移（m/z）为79.9或中性损失（m/z）为80或98通常被认为发生了磷酸化修饰。它不仅适用于磷酸化检测，还可用于磷酸化位点的鉴定。

质谱是开展蛋白质鉴定的核心技术之一，已然成为蛋白质组学研究的主流手段，同样质谱法鉴定磷酸化位点存在一些缺陷。首先，磷酸化肽段带负电荷而电喷雾质谱在正电荷模式下进行电离，使用质谱法检测的磷酸化肽段通常较弱，且电离效果较差。其次，质谱仪在大量的非磷酸化蛋白的高背景下很难检测到低丰度蛋白的信号。可通过对样品中磷酸化肽段进行纯化富集避免以上缺陷。

质谱法已被用来确定磷酸化修饰位点和定量分析。然而，质谱分析较为昂贵，需要特定的设备，通常需要更多的定量数据，所以质谱分析通常是结合其他生化方法用于分析蛋白质的翻译后修饰。

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Q ExactiveHF质谱平台，Orbitrap Fusion质谱平台，Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供磷酸化位点质谱检测服务技术包裹。只需要将您的实验目的告诉我们并寄送样品，百泰派克生物科技负责项目后续，包括蛋白提取、蛋白酶切、磷酸化肽段富集、肽段分离、质谱分析、质谱原始数据分析、生物信息学分析所有事宜。