Olink蛋白质组学原理

在高通量蛋白质组学研究中，如何实现低样本量、高灵敏度和高特异性的蛋白检测，是长期以来的技术瓶颈。Olink®蛋白组学平台通过引入Proximity Extension Assay（PEA），创造性地融合了抗体识别的特异性与核酸扩增的高灵敏度，从原理层面突破了传统蛋白检测手段的局限。

 

一、Olink蛋白质组学的核心原理：Proximity Extension Assay（PEA）

1、双抗体识别机制

每个待测蛋白对应一对高亲和力抗体，这两种抗体分别连接一段不同的寡核苷酸探针（DNA序列）。只有当两抗体同时识别并结合同一个蛋白分子时，这对探针才会空间接近，为后续反应创造条件。这一步类似于“双钥匙机制”，极大提高了检测的特异性，有效避免了非特异结合带来的信号干扰。

 

2、DNA探针连接

当DNA探针随抗体定位到同一蛋白时，它们会发生邻近连接反应（Proximity Extension），形成一条新的DNA链。这条链是唯一对应于该蛋白的编码标签，为后续的核酸扩增提供模板。这也是PEA命名的来源：“Proximity” 表示空间接近，“Extension” 表示延伸生成连接产物。

 

3、qPCR 或 NGS 扩增检测：实现灵敏定量

生成的DNA模板可通过以下两种方式扩增和定量：

（1）Target Panel（qPCR检测）：应用96或384孔板进行实时荧光定量PCR（RT-qPCR），适用于小规模多样本研究；

（2）Explore平台（NGS检测）：通过Illumina高通量测序仪进行文库测序，适合超高通量（3000+蛋白）需求。

 

核酸扩增的指数式放大，使得平台可以检测到极低浓度（fg/mL级别）的蛋白，特别适用于细胞因子、激素、炎症小分子等低丰度蛋白。

 

二、数据输出：NPX 值如何体现蛋白丰度？

Olink平台最终输出的蛋白定量结果为NPX（Normalized Protein Expression）值，是基于Ct值（qPCR）或序列计数（NGS）标准化后得到的对数尺度表达值。

NPX具有以下特点：

（1）为单位无关的相对表达量；

（2）可进行组间差异分析、聚类、热图可视化等；

（3）不直接表示绝对浓度，但具有良好的动态范围和批次一致性，适合横向比较。

 

百泰派克生物科技提供基于NPX的差异表达分析、功能富集分析、机器学习建模等多层次数据挖掘服务，帮助科研人员高效解读Olink数据。

 

三、Olink蛋白质组学技术原理优势总结

 

 



 

四、Olink蛋白质组学核心应用

Olink的PEA原理也在推动多种前沿应用的发展，包括：

1、多组学整合分析：将Olink蛋白组学与转录组、代谢组联合建模，发掘新的调控通路；

2、早期疾病预测：利用其高灵敏度，在亚临床阶段发现早期生物标志物；

3、药物反应监测：在干预前后动态追踪蛋白表达谱变化；

4、组织液/脑脊液研究：传统质谱难以胜任的极低丰度蛋白样本，Olink可胜任。

 

百泰派克生物科技已完成多个基于Olink平台的科研与临床项目，具备如下优势：提供样本前处理规范指导（含低丰度样本）；协助选择最适合研究问题的Panel组合；全流程项目管理，对接Olink原厂检测体系；高水平生信团队，支持差异分析 + 网络构建 + 生物学注释。Olink蛋白质组学平台之所以受到广泛青睐，正是基于其独特的PEA技术原理。通过双抗体识别、空间依赖连接和核酸扩增检测的协同作用，Olink实现了蛋白检测在灵敏度、特异性、通量、稳定性上的多重突破。

 

百泰派克生物科技——生物制品表征，多组学生物质谱检测优质服务商

 

相关服务：

Olink蛋白质组学