福林酚法测定蛋白含量标准曲线制作

福林酚法是测定蛋白含量常用的方法。使用福林酚法测定样品中目标蛋白的含量时，需要先建构一系列已知浓度梯度的蛋白溶液，然后通过分光光度法（600 nm）测量这些蛋白溶液的吸光度值，根据测得的吸光度值与对应浓度构建标准曲线，由于吸光度与蛋白质含量成线性关系，再测定未知浓度的蛋白溶液的吸光度值，就可以将吸光度值带入标准曲线计算出目的蛋白的含量。下面介绍福林酚法测定蛋白浓度时标准曲线的制作过程。

福林酚法测定蛋白浓度标准曲线图的制作

1、试剂与材料

● 标准蛋白溶液（100μg/mL）：纯牛血清血蛋白（BSA），预先测定蛋白含量，根据其纯度用蒸馏水配制成100μg/mL蛋白溶液。

● 福林酚试剂甲：吸取试剂A（0.2M 氢氧化钠与4%无水碳酸钠溶液等体积混合）100 mL，加入试剂B（2% 酒石酸钾钠溶液与1% 五水硫酸铜等体积混合）2 mL混合而成。

● 福林酚试剂乙：在2 L的磨口回流装置中加入100 g 二水钨酸钠，25 g 二水钼酸钠，700 mL 水，再加50 mL 85%磷酸及100 mL 浓盐酸，充分混合后，以小火回流10 h。再加入150 g 硫酸锂，50 mL 水及数滴液溴，然后开口继续沸腾15 min，以便驱除过量的溴。冷却后定容成1 L。过滤，置棕色瓶中，保存在冰箱中。使用时用氢氧化钠标准滴定溶液滴定，以酚酞做指示剂，而后适当稀释（约1倍），使最后浓度为1mol/L H⁺（1N 酸），此即为Folin-酚试剂乙。