怎么检测蛋白乙酰化
乙酰化修饰是真核生物体内常见的组蛋白和非组蛋白翻译后修饰,乙酰化修饰通过影响蛋白质的结构从而影响其生物学功能,参与调控多种生命活动如基因转录、细胞代谢通路以及酶活性等。
目前常用的乙酰化蛋白质检测方法主要有免疫印迹法和基于质谱的方法。免疫印迹法(WB,Western blotting)又称蛋白免疫技术,其利用抗原抗体特异性结合的原理对乙酰化蛋白进行检测,先将蛋白样品进行聚丙烯电泳分离,然后将分离产物转移到固相载体上与抗体(一抗)结合,再将其与特殊标记的二抗进行免疫反应,通过放射自显影等方法进行检测。由于正常生理条件下乙酰化蛋白质的丰度较低,基于质谱的检测方法需要先将乙酰化蛋白进行分离富集再进行质谱分析,然后将质谱数据进行生物信息学分析对乙酰化蛋白进行鉴定。
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