Edman降解的步骤是什么
Edman降解的步骤主要包括以下几个关键过程：
1.将待测序的蛋白质或多肽吸附到固体表面上，常见的一种固体基材是涂有聚丁二烯（一种阳离子聚合物）的玻璃纤维。
2.偶联反应：在弱碱性条件下（如12%三甲胺），异硫氰酸苯酯（PITC）与蛋白质或多肽的N末端氨基酸残基结合，形成苯氨基硫甲酰（PTC）衍生物。这一步需要在氮气环境中进行，并在45-48℃下进行偶联化学反应。
3.裂解反应：在无水强酸（如三氟乙酸，TFA）的作用下，PTC-肽发生环化裂解，释放出N末端氨基酸的噻唑啉酮苯胺（ATZ）衍生物。这一步需要在45-48℃下进行，并使用惰性气体干燥。
4.转化反应：在稀酸作用下，不稳定的ATZ衍生物转化为稳定的苯乙内酰硫脲（PTH）衍生物。这一步需要在45-50℃下进行10-20分钟。
5.分析：利用高效液相色谱（HPLC）对PTH-氨基酸进行鉴定，并与标准图谱进行比较，从而确定N末端氨基酸的序列。
6.重复：整个Edman降解的步骤循环进行，每次鉴定一个切下的末端氨基酸，直至完成整个N末端序列的分析。
但是降解反应中如果蛋白质N端氨基已被乙酰基、甲酰基或焦谷氨酰胺基阻断，造成没有游离N末端与PITC反应，则须通过化学或酶促方法切割以产生具有游离N末端的片段。因此对于不同的蛋白样品类型需根据需要进行相关前处理再进行分析：
1.对于不含盐的蛋白样品，可直接滴至PVDF膜上，进行Edman降解的步骤分析；
2.对于高盐蛋白溶液样品，需先进行脱盐处理。可利用可拆过滤头、注射器、PVDF膜、EP管组装简易除盐装置。PVDF膜经活化后，注入加水稀释后的样品进行清洗除盐，之后可取出加载样品的PVDF膜进行分析；
3.对于抗体样品，可先进行SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳）分离后，电转印至PVDF膜上，使用丽春红染液进行染色，待自然晾干后分别剪切重链和轻链的条带，再依次进行分析。
4.对于焦谷氨酸环化封闭样品，可利用焦谷氨酸氨肽酶先进行焦谷氨酸去除，再进行SDS-PAGE电泳和电转印，之后再进行分析。
上述流程可依据样品类型灵活调整，但始终遵循关键Edman降解的步骤，以保证序列测定的准确性和完整性。
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