蛋白分析FAQ汇总

• • 为什么IP泳道有目的条带但input泳道没有？

  目的蛋白浓度不高时可能出现这种情况，因为IP能浓缩富集而WB不能。相关服务:CO-IP免疫共沉淀法蛋白互作分析

• • Gst pull-down目的蛋白结合效率低？

  这种情况可以考虑蛋白序列出现移码等错误、GST 融合蛋白被机械裂解的方法变性（比如超声）、GST 融合蛋白发生聚集沉淀、GST融合蛋白被过度稀释、结合缓冲条件不适宜等。相关服务:GST pull-down蛋白相互作用分析

• • Gst pull-down目的蛋白洗脱不下来？

  检查洗脱液的体积、缓冲液中谷胱甘肽浓度及离子强度是否过低。相关服务:GST pull-down蛋白相互作用分析

• • 为什么Gst pull-down洗脱的蛋白中有杂质?

  可能时细胞破碎时超声处理过度、分子伴侣被共纯化以及GST融合蛋白被蛋白酶部分降解等原因造成的。相关服务:GST pull-down蛋白相互作用分析

• • 蛋白质N端测序样品有什么要求？

  1、纯度：>95（基于摩尔数）；2、含量：50-100 pmol(液体体积控制在20ul)；3、修饰封闭：N 端未被封闭；4、样品形式：液体、干粉或PVDF膜；5、无干扰物如蛋白酶、氨基酸、胺、盐分、乙醛和去污剂等。相关服务:基于Edman降解的蛋白N端序列分析

• • 进行N端测序需要提供哪些样品信息？

  纯度、样品可能修饰情况、制备方法、验证目的以及表观分子量。相关服务:基于Edman降解的蛋白N端序列分析

• • 液体蛋白样品进行N末端测序有什么要求？

  对于溶剂的要求：不可含有氨盐、Tris等、 1 级或2级胺的盐溶液以及SDS。相关服务:基于Edman降解的蛋白N端序列分析

• • PVDF膜蛋白样品进行N末端测序有什么要求？

  1、样品量：5-8 条泳道，每条泳道的样品尽量用最高浓度样品，上最大体积（尽量使条带长胖为正常的 2-3 倍宽度）；2、硝酸纤维素膜：具有耐药性，不能使用；3、在电转印中使用的缓冲液尽可能不含甘氨酸；4、染色剂推荐使用考马斯亮蓝。相关服务:基于Edman降解的蛋白N端序列分析

• • 用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移？

  也许是因为温度控制不好、流动相发生变化以及柱子未平衡好。相关服务:蛋白质纯度分析（分子筛/反相色谱）

• • 用HPLC进行分析时保留时间发生快速变化是什么原因？

  1、流速发生变化-重新设定流速，使之保持稳定；2、泵中有气泡-通过排气等操作将气泡赶出；3、流动相不合适-改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合。相关服务:蛋白质纯度分析（分子筛/反相色谱）