2D-DIGE进行定量蛋白质组学分析，为什么实验中有Analytical Gel和Prep Gel步骤？

差异凝胶电泳2D DIGE 进行定量蛋白质组学分析，一般从分析凝胶开始实验，原因如下： 分析凝胶检测时，一般使用大约 25 µg 样品，而制备凝胶使用大约 250 µg 每个样品。分析凝胶的总蛋白上样量约为 75 µg，而制备凝胶的总蛋白上样量约为 750 µg。由于分析凝胶含有较少的样品量，从而 IEF 中的离子和盐较少，因此它将提供更准确的蛋白质变化定量）和更高的图像质量，进行结果展示效果更好。 分析凝胶检测后，进行凝胶内数据分析。根据分析凝胶结果，如果您想要的斑点来自对照（通常是下调）或来自处理（通常是上调或新诱导的蛋白质），可以放置​​更多的对照或处理样品。相比之下，由于蛋白质含量较多，制备凝胶不太可能提供此类信息。 从分析凝胶中，您将知道是否需要在下一个二维实验中通过改变 IEF 的 pH 范围或 SDS 凝胶的百分比（用于分辨较低或更高分子量的蛋白质斑点）。相比之下，由于蛋白质含量过多，制备凝胶较难提供此类信息。 进行制备凝胶检测的主要目的是通过质谱获得足够的蛋白质量用于蛋白质鉴定。



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