蛋白分析FAQ汇总

• • 质谱分析为什么有时会受到聚乙二醇(PEG)的污染？

  四分之三的膜过滤器（0.2或0.45μm，用于过滤HPLC样品）在LCMS中会产生PEG和脂肪酸酰胺。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • 什么是标签蛋白？

  免疫沉淀的一个固有缺点是产生适用于单一已知蛋白质的抗体很难。为了克服这一缺点，研究小组经常设计专注于目标蛋白 C 端或 N 端的标签。标签位于主要肽序列中，该肽序列结合在蛋白质中的。标签的例子包括绿色荧光蛋白、谷胱甘肽 S 转移酶和 Flag 标签。标签用于附着蛋白质的各种用途。 谷胱甘肽-

• • MS-IP 是如何进行的？

  MS-IP 或质谱与共免疫沉淀相结合是识别在 Co-IP 中分离的相互作用伙伴的直接方法。该实验通过质谱分析来自 Co-IP 的洗脱样品，并使用生物信息学软件分析生成的 MS 数据以鉴定蛋白质。除了鉴定之外，IP-MS 还有助于在对照样品和处理样品之间对靶蛋白以及脱靶蛋白产生倍数富集。为了成

• • GST-pull down 与 Co-immunoprecipitation 有何不同？

  免疫共沉淀用于免疫沉淀天然状态的蛋白质，保持复合物状态的蛋白质代表其天然状态。然而，Co-IP 不能排除复合物中存在的蛋白质是直接相互作用还是通过第三种蛋白质相互作用来的。反之，GST 下拉试验是一种体外检查蛋白质-蛋白质相互作用的方法。在 GST-pull down 分析中，谷胱甘肽-S-

• • 色谱法如何帮助简化细胞内容物的分析？

  细胞内容物的分析是一个非常具有挑战性的问题——通常需要各种分馏，如离心分离细胞器、盐析蛋白质、透析以去除盐和小分子等。这可能会将问题的规模缩小到10到数百种丰富的化学物质。色谱法（HPLC在其许多实施例中的一种）可以将其减少十倍或以上。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • 质谱可以分析什么？

  质谱可以敏感的定量报告混合物的生物分子组分的质量。如果两个生物分子具有不同的质量，那么即使它们共同洗脱，它们也会被分解相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • 在鉴定或定量复杂生物样品的给定成分方面，样品离子扫描如何优于蛋白质混合物的单四极分析？

  在产品离子扫描中，可以在一级质谱中筛选混合物中感兴趣成分的质量，在二级质谱中对其进行碎片化，然后在三级质谱中扫描碎片的质荷比信息。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • 所有蛋白质都能结合强阳离子交换树脂吗？

  不是的，阳离子交换树脂在表面上具有阴离子（强酸）基团，如R-SO3-。因此，它将结合净阳离子或表面至少有一些正电荷的蛋白质。它不会结合纯阴离子蛋白质。它不会与pI高于缓冲液pH＝7.5的蛋白质结合。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • 蛋白质如何与阳离子交换树脂结合？

  蛋白质外围的阳离子（赖氨酸和精氨酸）基团与树脂上的磺酸盐之间的静电吸引。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • 蛋白质与阳离子交换树脂是一价还是多价结合相互作用？

  可能是多价的。蛋白质表面的赖氨酸基团越多，结合点越多，结合越强。相关服务:蛋白质质谱鉴定