免疫沉淀有哪些不同的方法？

免疫沉淀可通过直接和间接方法进行。直接法：在这种方法中，珠子首先与抗体结合，然后将抗体-珠子复合物添加到蛋白质混合物中，并在 2-8°C 的温度下旋转孵育。孵育时间完全取决于靶蛋白浓度以及抗体对靶蛋白的特异性。接下来，目标蛋白通过抗体被珠子捕获，或者简单地进行免疫沉淀。抗体被固定在固相基质上，例如显微琼脂糖和超顺磁珠。直接法仅适用于目标蛋白含量较高或抗体需求较少的情况。间接方法：首先将抗体添加到细胞裂解物中，因此抗体与靶蛋白结合形成蛋白质复合物。随后添加涂有蛋白质 A/G 的珠子以靶向复合物中的结合蛋白。除此之外，流程趋同并且最终结果是相同的。然而，过量的抗体会导致与 A/G 珠子结合，因为游离抗体比结合抗体移动得更快。当靶蛋白浓度低或抗体对靶蛋白亲和力差时，间接法非常适用。为了控制背景结合，样品和珠子需要孵育更短的时间。

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