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-N-糖基化修饰发生在肽链的天冬酰胺(Asn)上,是最常见的糖基化修饰类型。N-糖结构是由14个单糖的前体链加到Asn残基上形成的,N糖修饰发生修饰的位点是肽链与糖链的结合位点。
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-随着蛋白质糖基化修饰的深入研究,蛋白质N-糖基化(也称作N糖)的检测也越来越广泛。N糖是由14个单糖(Glc-3-Man-9-GlcNAc-2)与蛋白质上天冬酰胺(Asn)的NH2以N-糖苷键的形式共价连接形成。目前,质谱(MS)已成为N糖检测的首选方法,通常使用质谱法对N糖进行检测。
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-液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)就是将色谱的分离能力与质谱的定性功能结合起来,实现对复杂混合物进行更准确的定量和定性分析。通常情况下,同一细胞/组织的蛋白样品,在不同时间/不同环境条件下蛋白谱的表达也存在不同,可通过蛋白LC-MS/MS分析对其进行表征和详细分析。
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-目前运用较广泛的识别和量化复杂蛋白质样品的技术通常是液相色谱(LC)和质谱(MS)技术,液相色谱-质谱联用仪(LC-MS)结合了LC的物理分离能力和MS的质量分析能力,用于样品中蛋白定性定量分析。其中LC技术将多种组分分离,具有高分子特异性和检测灵敏度的MS技术则负责检测分析各组分的结构特
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-N糖对糖蛋白的结构和功能具有重要作用,N糖检测是解析N-糖基化过程及糖蛋白功能的重要前提之一。由于糖蛋白释放的N糖数量有限,N糖分析一直非常具有挑战性,质谱法由于其高灵敏度和选择性而成为N糖检测分析的重要工具。
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-蛋白质组学是指大规模地对蛋白质的表达水平、翻译后修饰、蛋白质相互作用等进行研究。蛋白质组研究不仅可以全景式地揭示生命活动的分子本质,还能阐明生命在生理或病理条件下的变化机制。近年来,色谱和质谱技术的进步驱动了蛋白质组学的快速增长,逐步实现了“深度覆盖”。
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-在开始基于质谱的N-糖检测之前,需要进行N-糖样品制备和分析,主要包括糖蛋白富集、N-糖释放与标记、N-糖衍生化等内容。
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-基于液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)的蛋白质组学可以揭示定量蛋白质组的状态,从而提供深入了解相关细胞或组织生物化学状态的机会。蛋白质并不是孤立的分子而是具有三维结构的物质,并且协同其他蛋白质分子一起参与调控各种生命活动,它们的空间结构和模块构成与其表达水平同样重要。基于LC-MS/MS
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-蛋白糖基化修饰是糖链分子在糖基转移酶的催化作用下与肽链氨基酸侧链活性基团反应生成糖苷键,从而使糖链连接到蛋白质上。蛋白N端糖基化是将含有14个单糖的糖链(Glc-3-Man-9-GlcNAc-2)与蛋白质上天冬酰胺(Asn)的酰胺基团以N-糖苷键的形式共价连接,从而使糖链由磷酸多萜醇载体上
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-随着高效液相分离技术(HPLC)和静电场轨道阱(Orbitrap)质谱技术的发展,液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)成为目前蛋白质组学分析的主要技术。基于LC-MS/MS的蛋白质组学技术取得了重大进展,在灵敏度、选择性、重现性、蛋白质覆盖率和成本效益方面的表现越来越好。基于LC-MS/M
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