N-糖样品制备和分析

在开始基于质谱的N-糖检测之前，需要进行N-糖样品制备和分析，主要包括糖蛋白富集、N-糖释放与标记、N-糖衍生化等内容。

糖蛋白富集：由于正常生理情况下糖基化蛋白的丰度较低，因此需要对N-糖基化修饰蛋白（即糖蛋白）进行富集，富集方法主要包括凝集素富集、硼酸亲和富集、亲水色谱HILIC富集和肼化学富集等。其中HILIC富集应用比较多，HILIC富集采用极性固定相和非极性流动相的色谱技术，利用糖肽和糖链的亲水性进行分离。

N-糖释放与标记：糖蛋白酶切通常使用PNGase（肽-N-糖苷酶）对糖肽进行酶促去糖基化，PNGase是一种切割N-乙酰氨基葡萄糖（GlcNAc）与天冬氨酸（Asn）残基之间的键的酶，并通过同位素标记进行定量。

N-糖衍生化：释放的N-糖通过2-氨基苯甲酰胺（2-AB）等物质进行衍生化处理，经过以上衍生化的N-糖样品才可用于基质辅助激光解吸-飞行时间质谱（MALDI TOF MS）上机分析。

百泰派克生物科技采用MALDI TOF MS高分辨质谱系统和UHPLC技术提供N-糖分析服务，该服务可用于鉴定血浆/血清、细胞、组织或生物体表达的全部N-糖，所有与蛋白质连接的聚糖都将通过酶消化水解，通过亲水色谱法分离后，使用质谱系统进行定量分析。您只需将实验目的告知并将样品寄出，我们将负责项目后续所有事宜，包括蛋白提取、蛋白酶切、肽段分离、质谱分析、质谱原始数据分析、生物信息学分析。