蛋白分析FAQ汇总

• • 差异凝胶电泳2D-DIGE进行定量蛋白质组学分析，可以检测多少个蛋白点？

  差异凝胶电泳2D DIGE 进行定量蛋白质组学分析时，如果使用 pH3-10 IPG 胶条检测 2000-5000 个蛋白质斑点。如果使用额外的 IPG 胶条，例如 pH 4-7、pH 6-9 和 pH 7-11，可以检测到超过 5000 个点。 相关服务: 二维凝胶电泳服务

• • 差异凝胶电泳2D-DIGE进行定量蛋白质组学分析，数据报告中包括哪些信息？

  差异凝胶电泳2D DIGE， 进行定量蛋白质组学分析后的数据报告一般包含两个主要部分： ImageQuant 分析：单个样品的凝胶图像和两个样品图像的叠加； DeCyder分析：对不同样品之间的所有斑点进行定量分析和比较。 相关服务: 二维凝胶电泳服务

• • 为什么要使用2D Wb来进行宿主残留蛋白 HCP抗体覆盖率检测而不是 ELISA、LCMSMS 或 AAE？

  通过2D Western blot 进行宿主残留蛋白 HCP（Host Cell Protein）检测，一般采用荧光标记进行，可以从同一凝胶和同一膜上生成 HCP 和 WB 图像。数据报告提供 HCP、Western 印迹和 HCP/Western 叠加图像，可以直接显示 ELISA 或 L

• • 通过2D Wb进行宿主残留蛋白 HCP检测，1 次 HCP 分析测试可以分析多少个 HCP 样品？

  1 次 HCP 分析测试可进行 3 个样品检测。检测报告中可提供不同 HCP 样本的单个 HCP 图像和叠加图像，为您提供了其他平台无法实现的 HCP 组成、修改和碎片的直接可视化和比较。此外，定量分析提供点计数、相似性分析、总 HCP 和 DS 数量。 相关服务: 蛋白质免疫印迹和电转

• • 通过2D Wb进行宿主残留蛋白 HCP检测，HCP斑点可以从大量原料药（DS）中分离出来吗？

  答案是肯定的。根据原料药的分子量和等电点，我们可以修改 IEF 和 2D 条件以实现 HCP 与 DS 的最佳分离。 相关服务: 蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • SWATH定量—为什么不通过在 MS 和 MS/MS 级别对样品中的每个离子进行测序来生成数据库

  理论上应该这样做。 理想情况下，机器的速度足以在 0.7 Da 的小窗口中扫描整个 m/z 范围，这对应于 MRM 窗口，并且是我们可以用四极杆隔离的最小窗口。扫描蛋白质通常的m/z范围（从350到1250 m/z）代表了大约1285个独立的0.7 Da窗口，在这个窗口中我们必须分离和破碎前

• • SWATH定量—是否可以通过将结果映射到理论数据库上将离子与蛋白质联系起来？该映射是由MS/MS鉴定软件完成的吗？

  可以，一旦IDA运行完成，每个离子的MS和MS/MS信息都被映射到一个理论数据库中，以确定样品中存在的肽和蛋白质。这个过程可以通过几种算法完成，包括Mascot、OMSSA、ProteinPilot或多算法界面，如搜索GUI。 相关服务: SWATH定量蛋白组学服务

• • 什么是SILAC技术，我将如何利用它?

  SILAC即细胞培养条件下稳定同位素标记技术(Stable Isotope Labeling By Amino Acids In Cell Culture)，它可用于对培养细胞产生的多个样品进行相对定量。在典型的SILAC实验中，两个细胞群在轻培养基或重培养基中生长，后者含有 15N/13C

• • 哪些细胞适合SILAC分析?

  许多转化的细胞系都适合SILAC分析。 相关服务: SILAC技术

• • 做免疫共沉淀实验时，抗体、磁珠和样品的加样顺序？

  可以先加样本和抗体进行反应，然后加磁珠；或者先加抗体和磁珠，然后再加入样本。不推荐同时加入样品、磁珠和抗体，同时加入三个组分可能会使最终的结果变差。相关服务:CO-IP免疫共沉淀法蛋白互作分析