蛋白分析FAQ汇总

• • Edman测序图谱中出现多个氨基酸的峰是什么原因？

  可能是样品纯度不够或者样品有降解造成的。建议用样品跑一下HPLC或者跑个SDS-PAGE胶检测一下样品纯度。相关服务:基于Edman降解的蛋白N端序列分析

• • 为什么Edman测序的图谱一个氨基酸的峰也没有？

  有两种原因会导致这种情况：1、蛋白样品N端封闭；2、上样量太少，信号强度达不到检测线。相关服务:基于Edman降解的蛋白N端序列分析

• • Edman测定对蛋白样品纯度有要求吗？

  当然有，不纯的样品每个循环有多个氨基酸出峰，无法归属到蛋白的序列；蛋白纯度至少达到90%以上。相关服务:基于Edman降解的蛋白N端序列分析

• • 如果蛋白样品含有多条多肽链，如何进行Edman测序？

  先将蛋白进行SDS-PAGE电泳，将条带分开，然后将胶上的蛋白条带转移到PVDF膜上，染色后分别剪切下相应的条带进行Edman测序。相关服务:基于Edman降解的蛋白N端序列分析

• • 什么样的蛋白不适合用Edman降解法进行测序？

  N末端封闭或发生化学修饰的；N端序列中有太多非标准氨基酸的。相关服务:基于Edman降解的蛋白N端序列分析

• • CO-IP实验中的input表示什么意思？

  input表示阳性对照。免疫共沉淀实验中，会直接取细胞裂解液进行WB，用于验证细胞裂解液中确实存在目的蛋白，即阳性对照。相关服务:CO-IP免疫共沉淀法蛋白互作分析

• • CO-IP实验中用到的两种抗体要同源的还是不同源的？

  建议最好选择两个不同源的抗体。相关服务:CO-IP免疫共沉淀法蛋白互作分析

• • 免疫共沉淀实验如何避免假阳性？

  适当降低抗体浓度；选择特异性较好的抗体若抗体特异性不好，则换抗体相关服务:CO-IP免疫共沉淀法蛋白互作分析

• • CO-IP实验中使用的ProteinA/G琼脂糖珠有什么作用？

  ProteinA/G磁珠能特异性的结合抗体FC片段，抗体可以结合与目标蛋白相互作用的蛋白。相关服务:CO-IP免疫共沉淀法蛋白互作分析

• • 免疫共沉淀常使用的抗体有哪些？

  常用的单克隆抗体是正常小鼠的IgG；常用的多克隆抗体为正常兔IgG。相关服务:CO-IP免疫共沉淀法蛋白互作分析