蛋白分析FAQ汇总

• • SWATH定量—是否可以通过将结果映射到理论数据库上将离子与蛋白质联系起来？该映射是由MS/MS鉴定软件完成的吗？

  可以，一旦IDA运行完成，每个离子的MS和MS/MS信息都被映射到一个理论数据库中，以确定样品中存在的肽和蛋白质。这个过程可以通过几种算法完成，包括Mascot、OMSSA、ProteinPilot或多算法界面，如搜索GUI。 相关服务: SWATH定量蛋白组学服务

• • 什么是SILAC技术，我将如何利用它?

  SILAC即细胞培养条件下稳定同位素标记技术(Stable Isotope Labeling By Amino Acids In Cell Culture)，它可用于对培养细胞产生的多个样品进行相对定量。在典型的SILAC实验中，两个细胞群在轻培养基或重培养基中生长，后者含有 15N/13C

• • 哪些细胞适合SILAC分析?

  许多转化的细胞系都适合SILAC分析。 相关服务: SILAC技术

• • 做免疫共沉淀实验时，抗体、磁珠和样品的加样顺序？

  可以先加样本和抗体进行反应，然后加磁珠；或者先加抗体和磁珠，然后再加入样本。不推荐同时加入样品、磁珠和抗体，同时加入三个组分可能会使最终的结果变差。相关服务:CO-IP免疫共沉淀法蛋白互作分析

• • 常用的蛋白质纯化的方法有哪些？

  蛋白质纯化是将目的蛋白从其他组分中分离出来，往往是进行蛋白质分析不可或缺的一步。常用的纯化蛋白质的方法有凝胶过滤层析、离子交换层析、疏水层析和亲和层析等。相关服务:SDS-PAGE蛋白质纯度分析

• • 分子筛纯化蛋白前如何净化样品？

  在色谱分离前对蛋白样品进行离心或过滤，离心可以去除绝大多数块状物，如果离心后效果不明显还可用醋酸纤维薄膜或PVDF滤膜进行过滤。相关服务:蛋白质纯度分析（分子筛/反相色谱）

• • SEC实验中溶液交换不充分是什么原因？

  可能是由于样品上样量太多，可将样品分成几份，并控制上样时间间隔。相关服务:蛋白质纯度分析（分子筛/反相色谱）

• • 如何提高SEC分子筛纯化蛋白的分辨率？

  1、提高色谱柱装填均匀度；2、适当提高柱床高度；3、减少上样体积，控制最大上样体积不超过柱体积的30%；4、保持样品与洗脱液的黏度相同；5、根据样品特点来调节洗脱溶液的离子强度或亲水性。相关服务:蛋白质纯度分析（分子筛/反相色谱）

• • 如何提高SEC色谱峰对称性？

  提高色谱柱装填均匀度；更换干净无污染的色谱柱。相关服务:蛋白质纯度分析（分子筛/反相色谱）

• • 怎么避免SEC谱图出现肩峰？

  避免柱床松动、柱筛板堵塞或柱干裂的情况发生。相关服务:蛋白质纯度分析（分子筛/反相色谱）