蛋白分析FAQ汇总
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蛋白质分离纯化后常常要脱盐，这些盐主要来源于生物体内的各种离子（如钠离子、钾离子、氯离子等）以及实验用到的提取液中的缓冲盐、洗脱液中的盐、某些变性剂的盐成分。高浓度盐可能影响蛋白质的活性、稳定性以及其与其他分子的相互作用，在后续分析方法中，如电泳、质谱、晶体学研究等，产生干扰信号或降低测量准
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• SDS-PAGE里面蛋白质都有相同的荷质比，那么如何实现蛋白质的分离呢？
当我们说在SDS-PAGE中蛋白质具有相同的荷质比，意思是说蛋白质在SDS的作用下呈线性并带有统一的负电荷。具体来说，每个氨基酸残基上大约绑定了一个SDS分子，使蛋白质在电场中的迁移与其分子量成反比，而不受其原生电荷的影响。 蛋白质的分离是基于它们的分子大小来实现的。在SDS-PAGE中，
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• 蛋白电泳时，为什么经浓缩胶压成一条线后，达到分离胶后会再次变宽？
在SDS-PAGE电泳过程中，蛋白质样品首先被加载到浓缩胶（或叫堆栈胶）上，然后穿越浓缩胶进入分离胶（或叫分辨胶）。这两种胶的作用和性质都不同： 1.浓缩胶（堆栈胶）： 它的聚丙烯酰胺浓度较低，孔隙大小较大。蛋白在此胶中不是按分子量分离的，而是主要为了使所有的蛋白质集中到一个相对狭窄的区域
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在SDS-PAGE电泳后，如果你希望从胶块中回收某一特定的蛋白条带，可以通过以下步骤进行纯化： 1.胶片染色和去色： 首先，将整个电泳胶用适当的染料（如考马斯亮蓝）进行染色。 经过一定时间后，用去色液去色，直至所需的蛋白条带清晰可见。 2.切割胶块： 使用干净、锋利的刀片或剪刀，沿着
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SDS-PAGE的分离能力取决于几个因素，特别是聚丙烯酰胺凝胶的浓度。不同的凝胶浓度对于不同大小的蛋白具有最佳的分辨率。一般来说： 1.低浓度的凝胶（如4%-8%）适用于大蛋白质（>100 kDa）的分离。 2.中等浓度的凝胶（如10%-12%）可以分离中等大小的蛋白质（约25-100
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竖直电泳（即在垂直方向上进行的SDS-PAGE）是蛋白质电泳的常用形式，其选择与以下因素有关： 1.分离效率： 竖直电泳提供了良好的分离效率和分辨率。随着蛋白质在凝胶中迁移，它们会在垂直方向上分离，从而使得在短时间内可视化多个不同大小的蛋白。 2.多样品同时加载：
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蛋白质电泳时出现的歪曲或斜线通常是由多种因素导致的。以下是一些常见的原因及其可能的解决方案： 1.不均匀的电场： 如果电场在凝胶间不均匀，可能导致蛋白质在凝胶中迁移不均匀。确保电极之间的连接良好，并检查是否有任何破损。 2.凝胶的不均匀性： 如果凝胶制备不均匀或出现气泡，可能导致蛋白的迁
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要比较7种细胞中所表达的蛋白质的差异，你可以采用以下方法： 1.二维电泳 (2-DE): 使用二维电泳可以将细胞的蛋白质按照等电点和分子量进行分离。不同细胞类型的2-DE图谱会展现出不同的蛋白质斑点模式。通过对比这些图谱，你可以观察到哪些蛋白质在某些细胞中表达而在其他细胞中不表达。 2.
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对于蛋白质组筛选出的大量差异蛋白，可以进行以下几种后续研究： 1.功能鉴定： 对差异蛋白的生物学功能进行深入研究，如其在细胞中的作用、调控网络等。 2.疾病相关性研究： 探讨差异蛋白在特定疾病或生理过程中的角色。例如，某些差异蛋白可能与某种疾病的发病机制、预后或治疗响应性有关。 3.结
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蛋白质的种属差异是指不同物种或种群之间，蛋白质的序列、结构和功能上的差异。这种差异源于生物的进化过程，反映了不同物种的进化关系和它们对特定环境适应的策略。 1. 蛋白质序列的种属差异： 每一个物种都有其特有的基因组，这些基因编码的蛋白质在序列上往往与其他物种存在差异。通过比较蛋白质的氨基酸
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