蛋白分析FAQ汇总

• • 蛋白质的翻译后修饰在哪里发生？

  翻译后修饰发生在内质网中，包括折叠、糖基化、多聚体蛋白质组装和蛋白水解裂解，它们使蛋白质成熟和活化。一旦生长的肽出现在内质网中并暴露于修饰酶时，它们就会发生。相关服务:翻译后修饰蛋白组分析

• • 质谱法可以提供关于蛋白质翻译后修饰的哪些信息？

  一个PTM的存在将改变修饰氨基酸残基和肽的质量。MS/MS通常揭示PTM的质量以及所修饰氨基酸残基的身份和位置。MS/MS是一种灵敏且快速的肽测序技术。相关服务:翻译后修饰蛋白组分析

• • HPLC—反相（RP）HPLC 和疏水相互作用色谱（HIC）有什么区别？

  在这两种情况下，固定相都比流动相更疏水。RP-HPLC固定相的疏水性通常高于HIC。RP-HPLC中的洗脱是通过用水溶性溶剂（例如醇或乙腈）调节流动相的极性而实现的。洗脱在等度（恒定的改良剂浓度）或梯度条件下（增加改良剂浓度）下进行。HIC固定相疏水性较弱，且通过降低盐浓度从而降低流动相中的

• • HPLC—什么时候建议使用保护柱？

  如果注射样品含有部分未知含量的复杂基质，则有必要使用保护柱。想要保护柱为分析柱提供足够的保护，必须经常更换，以避免柱性能恶化。通过监测板数（N）、压力和分辨率（Rs），可以评估保护柱和分析柱的性能以适时更换保护柱。通常，当N减少>10%、压力下降>10%、Rs变化>10%以及注入样品>150

• • HPLC—为什么在正相色谱中难以获得可重复的保留时间？

  正相高效液相色谱中保留时间变化的原因是保留时间与极性高的流动相组分（尤其是水）的含量密切相关。即使在流动相中没有添加水，或在极性很低的溶剂中，也会溶解少量的水。此外，裸露的二氧化硅极易吸湿，因此水会吸附在表面上。因此，正相系统中的水含量可以显著变化，很少受到控制。当使用半饱和流动相时，可获得

• • WB—为什么会出现漫反射带？如何解决？

  产生漫反射带的原因的可能是凝胶上的蛋白质过多。建议减少蛋白质的上样量相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • WB—为什么会出现白色条带？如何解决？

  白色条带可能是由于产生了过多的信号。建议降低抗体或蛋白质浓度。过量的抗体或蛋白质可导致极高水平的局部信号（通常在单个条带上）。这导致此时底物的快速、完全消耗。由于该反应完成后不会产生光，因此当暴露胶片时会产生白色条纹。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 蛋白质组学分析的要求是什么？

  1.动物样品组织和微生物样品的湿重应不小于200mg。植物样本组织和真菌样本的湿重应不小于2g；2.杂质浓度高或蛋白质含量低的样品的湿重应不小于3g，细胞计数应大约为5×107；3.体积超过5mL的溶液不应含有溶血剂，含血清的溶液应大于500uL；4.对于蛋白质提取物，浓度应不低于2mg/m

• • 蛋白质组分析通常提供多少种蛋白质？

  提供的蛋白质类型的数量取决于样品的复杂性、数据库能力、蛋白质含量和蛋白质组分离水平。LC-MS/MS可识别约500-1000种蛋白质。在肽和蛋白质水平上的一维蛋白质组学可以分离和识别大约1000-3000种蛋白质。相关服务:组学分析

• • iTRAQ和无标记定量技术之间的区别是什么？

  使用iTRAQ定量技术，可对来自不同来源的多个（最多8个/组）蛋白质样品进行标记、组合，并同时进行质谱分析。每个次级肽的质谱对应于其各自的离子强度，并表征样品中单个蛋白质的相对浓度。该方法可同时识别和定量蛋白质。使用无标记技术，从大规模蛋白质鉴定质谱数据中，我们可以比较不同样品之间对应的肽强