蛋白分析FAQ汇总

• • 蛋白质谱分析—我需要提交多少样品？

  所需的样品量取决于要执行的质谱服务类型。一般来说，1mL 10ppm样品或1mg固体形式足以满足所有类型的需求。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • 蛋白质谱分析—可以使用哪些溶剂？

  水、甲醇、乙腈、氯仿、四氢呋喃和二氯甲烷等溶剂通常被接受用于MS分析。应避免使用DMSO和DMF等高粘度样品。样品也可以在MS兼容的缓冲液中提交，用于电喷雾（ESI）或MALDI分析。这些缓冲液包括浓度为10mM或更低的乙酸铵、甲酸铵和碳酸氢铵。与MS相容的酸性添加剂包括乙酸、甲酸和三氟乙酸

• • 什么是“离子源”？

  一个分子要通过质谱仪进行分析，必须被转化为离子。这是在离子源中完成的。离子源有多种类型，但对于肽、蛋白质和寡核苷酸等生物样品最有用的离子源是基质辅助激光解吸电离（MALDI）和电喷雾电离（ESI）。在 MALDI 下，生物分子溶解在含有基质的溶液中，然后沉积在目标板上并被干燥。用激光照射含有

• • 区分两个约 100 KD 的蛋白质所需的最小质量差是多少？

  分辨两个 100 kD 蛋白质的最大限制是同位素分布的宽度，其在 100 kD 处约为 50 个质量单位宽（Yergey, J., Heller, D., Hansen, G., Cotter, R. J., and Fenselau, C., Anal. Chem.1983, 55, 35

• • 什么是中性丢失？

  该表达是指分子中不带电荷的片段的丢失。一般来说，中性分子是乙酸、磷酸或其他一些低分子量分子。当乙酰基或磷酸基团从完整分子的某个位置获取一个氢时，形成中性分子。这个过程发生在碰撞池中（也可能发生在喷嘴分离器区域（喷雾进入离子源的地方））。98 (H3PO4) 的中性丢失可用于检测磷酸化多肽，因

• • 什么是四极质谱仪？

  一个四极质谱仪由四个平行杆组成，其方向类似于罗盘上的四个极。南北对的射频和直流电压是一个极性，东西对的射频和直流电压是相反的极性。六极杆和八极杆相似，但分别有六根和八根杆。它们被用作碰撞和/或存储单元。在串联质谱仪（例如三重四极杆或 Q-Tofs）中，四极杆可用作一个质谱仪或一种离子传输模式

• • 2000的分辨能力是什么意思？

  在最简单的形式中，它意味着可以区分质量数为 2000 的峰和质量数为 2001 的峰。分辨率有更正式的定义，即 M/Dm，其中 M 是测量分辨率的质量，而 Dm 是两个等量级峰之间的质量差，其中峰之间的谷值为 10%。质量分辨能力是针对单个峰定义的，其中 Dm 是峰高 50% 处的峰全宽（即

• • 差异凝胶电泳2D DIGE 进行定量蛋白质组学分析需要进行技术复制吗？

  差异凝胶电泳2D DIGE 进行定量蛋白质组学分析，可以不进行技术重复。相关服务:二维凝胶电泳服务

• • 除了 N-和 O-糖基化，生物治疗药物最突出的 PTMs 是什么？

  大多数蛋白质对甲硫氨酸的氧化很敏感，在极少数情况下对色氨酸或组氨酸的氧化也很敏感。天冬酰胺的脱酰胺和谷氨酰胺较低程度的脱酰胺，以及脯氨酸和赖氨酸的羟基化经常出现。进一步的修饰是加二硫键、糖基化、磷酸化、硫酸化和末端截短。相关服务:翻译后修饰蛋白组分析

• • 序列验证需要多少材料？

  我们通常建议用 75 µg 进行 3 种不同的蛋白酶消化，以实现 100% 的序列覆盖。但根据您的蛋白质，每次 25 µg 的一到两次的消化物就足够了。相关服务:序列分析