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• • 磷酸化组学分析技术

  -磷酸化蛋白质组（Phosphoproteome）就是蛋白质组中全部的磷酸化蛋白质，而磷酸化蛋白质组学（Phosphoproteomics）就是针对磷酸化蛋白质的全面分析，包括对磷酸化的定性、定位和定量。

• • 蛋白激酶磷酸化活性位点

  -磷酸化对蛋白质功能的正常发挥起着重要的调节作用，该过程是由蛋白质激酶（protein kinases， PK）催化的把ATP或GTP的γ位磷酸基转移到底物蛋白质的丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸等氨基酸残基上的过程。蛋白激酶是激酶家族里面最大的族群，可通过催化特定底物蛋白的磷酸化将ATP末端的γ-磷

• • 磷酸化位点的质谱检测实验原理

  -磷酸化是研究最为频繁的翻译后修饰之一，它能控制下游信号通路调节细胞增殖、存活和分化等过程。如今，基于质谱的磷酸化蛋白质组学是一种成熟的方法，可对磷酸化蛋白和复杂样品中的肽进行磷酸化表征和定量。在此之前，进一步了解磷酸化位点的质谱检测实验原理显得愈发重要。

• • IMAC富集磷酸化肽段的步骤

  -磷酸化修饰是一种可逆的蛋白修饰，调控蛋白活性，传递信号，是细胞健康和疾病的核心调控机制；真核生物中预计有三分之一的蛋白具有磷酸化修饰。

• • 蛋白磷酸化检测最新方法

  -蛋白质磷酸化指由蛋白质激酶催化的把ATP或GTP的γ位的磷酸基转移到底物蛋白质氨基酸残基（丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸）上的过程，而其逆向过程则是由蛋白质磷酸酶去除相应的磷酸基团。对蛋白磷酸化进行检测与表征，可更好的了解磷酸化过程及其涉及到的生理活动调控及功能。

• • 测定磷酸化的位点

  -蛋白质磷酸化是一个通过蛋白激酶催化将ATP的磷酸基团转移到底物的氨基酸残基（丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸）上或者在信号作用下结合GTP的过程，其在细胞信号转到过程中起重要作用，是生物体内一种较为普遍的调节方式。

• • Pull-down silver stain

  -银染（silver stain）是对聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质进行染色的过程，在碱性条件下，甲醛可以将蛋白带上的硝酸银（银离子）还原成金属银，使银颗粒沉积在蛋白带上而染色。染色的程度与蛋白中的一些特殊的基团有关，不含或者很少含半胱氨酸残基的蛋白质有时候呈负染。

• • IP/Co-IP/Pull-down差别在哪

  -免疫沉淀（IP）和免疫共沉淀（Co-IP）是纯化富集目的蛋白和确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法，Pull-down与Co-IP的原理类似，均是利用亲和配体捕获互作蛋白，那么IP/Co-IP/Pull-down差别在哪？

• • Co-IP实验与Pull-down实验有什么不同

  -免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法，用于确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用。Pull-down 技术又称蛋白质体外结合实验（Binding assay in vitro）， 是一

• • Pull-down,质谱

  -质谱是蛋白互相作用研究中的蛋白质“检测器”，一般的质谱技术是不能直接研究蛋白互相作用的，需要和其他技术联用检测（如常见的免疫共沉淀和Pull-down等技术），然后再分析纯蛋白或者复合蛋白样品中存在的具体蛋白，甚至于可以比较不同样本中具体蛋白的相对丰度并寻找差异蛋白。