蛋白分析FAQ汇总

• • “无限直径效应”是什么？

  在HPLC分析时使用了高效微粒固定相及高压流动相，样品以柱塞式注入色谱柱后，因柱的阻力大，样品分子在柱中的分子扩散很小，直至它从色谱柱流出也未与色谱柱内壁接触，因而引起的色谱峰形扩展很小，能保持高柱效。相关服务:蛋白质纯度分析（分子筛/反相色谱）

• • 一级质谱和二级质谱有什么区别?什么时候做一级，什么时候做二级?

  一级质谱鉴定的方式主要指肽指纹图谱(PMF)，即利用质谱仪精确测量酶解片段的分子量并搜库比较实现蛋白质的鉴定；二级质谱是在一级质谱的基础上再选择部分肽段做进一步的破碎并对碎片进行深入分析和比较，鉴定出该肽段的序列并结合PMF的结果从而实现蛋白质的鉴定。二级质谱能够得到部分肽短的序列，具有更高

• • 质谱分析的样品不是来自模式生物怎么办？

  可以参考亲缘关系最近的模式生物做比对而实现蛋白质的成功鉴定，如果质谱图很好而没有鉴定结果说明这是一个全新的蛋白，可以采用从头测序等技术做深入分析与鉴定。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • 该如何判断质谱效果的好坏?

  做PMF一般得分超过60分(P<0.05)就算成功鉴定；而串联质谱，得分超过60分或者虽然没有超过60分，但是有最少一条肽段的得分超过30分就算成功鉴定。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • 一些特殊的质谱方法有什么用途？

  质谱的其它用途包括磷酸化位点分析、蛋白测序、混合蛋白鉴定(shotgun技术)以及分子量精确测定、二硫键位置分析等等。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • 串联质谱鉴定和质谱测序有什么区别?

  质谱鉴定往往采用软件对已有数据库进行自动检索匹配得到结果，而质谱测序则需要根据质谱峰图中相邻或者相近峰的分子量差异直接推算出肽段的序列。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • 为什么2DE的蛋白胶点有横的和竖的脱尾？

  横的脱尾可能是因为一向等电聚焦不完全、某些蛋白质本身的原因或者蛋白的丰度太高；竖的脱尾是因为二向电泳时蛋白的溶解度不好。相关服务:二维凝胶电泳服务

• • 哪些成分会影响2DE的效果？

  核酸、盐以及去垢剂等都会影响2DE电泳效果。相关服务:二维凝胶电泳服务

• • 2DE电泳的上样量应该在什么范围？

  上样量和样品有关。样品内蛋白种类多的上样量要大些，这样每个点才有足够的量被检测到。一般的全细胞裂解体系，上样量大概在100ug（银染）到 500ug（考染）之间。相关服务:二维凝胶电泳服务

• • 质谱分析前用胰蛋白酶酶解蛋白质时，碳酸氢氨的浓度应该是多少？

  酶解时碳酸氢氨的浓度一般在10-50 mM之间。浓度过大时，后续的冻干过程中会有较多的盐析出；盐浓度过小时，则不能有效的提供碱性pH的水解环境。相关服务:蛋白质质谱鉴定