圆二色谱用什么仪器啊,该怎样使用呢?
"圆二色谱"(Circular Dichroism,CD)是一种分析蛋白质和核酸等生物大分子二级结构的技术。它是利用生物大分子中的光学活性基团对左旋和右旋圆偏振光的吸收差异进行测量,由此获得样品的结构信息。CD光谱在200-250nm范围(也被称为远紫外CD光谱)常常用于测定蛋白质的二级结构,包括α螺旋、β折叠和无规卷曲结构等。
CD光谱的测定需要使用专门的仪器——圆二色光谱仪。使用的具体步骤如下:
1.样品制备:
首先需要准备待测样品。对于蛋白质,你需要制备出清晰、没有颗粒的溶液,浓度通常在0.1-1mg/mL之间,且需要确保溶液中没有会影响CD信号的杂质,如洗涤剂、盐类等。
2.设定参数:
在仪器上设定适当的参数,例如扫描的波长范围(对于蛋白质,通常是190-250nm)、波长间隔、每个波长的测量时间等。
3.基线校正:
使用样品中的溶剂进行基线校正,即测量并记录没有样品的溶液的光谱。
4.样品测量:
在基线校正后,将样品放入仪器中进行测量。
5.数据处理:
在测量结束后,需要对数据进行处理。包括基线校正,平滑处理,以及将光谱数据转换为蛋白质的二级结构含量等。
请注意,以上步骤可能需要根据具体的样品和仪器进行调整。
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