蛋白分析FAQ汇总

• • 一个蛋白一个化学药物小分子可以采用GST PULL down吗？

  GST Pull-Down 实验主要用来鉴定蛋白-蛋白间的相互作用。这种方法的原理是通过转基因方式将目标蛋白质与谷胱甘肽 S-转移酶（Glutathione S-transferase, GST）基因融合，利用GST蛋白与谷胱甘肽(Glutathione)的高亲和性，将GST融合蛋白与小鼠抗

• • 蛋白的肽链是如何测序的？

  蛋白的肽链测序是指确定蛋白质中氨基酸序列的过程。它是通过将蛋白质分解为小片段（肽段），然后对这些肽段进行测序来实现的。目前常用的方法是质谱法和DNA/RNA测序方法。1.质谱法测序：A.制备样品：将蛋白质进行消化，通常使用酶（如胰蛋白酶）将蛋白质分解为小肽段。B.质谱分析：使用质谱仪对肽段进

• • 怎么看哪个蛋白差异显著？

  要寻找显著差异的蛋白质，通常需要利用生物信息学方法进行差异表达蛋白质分析，常用的生信统计方法如t检验、方差分析、Wilcoxon等，这些方法将产生每个蛋白质的差异表达值（例如，fold change，log2(fold change)等）以及统计显著性指标（如p-value或校正后的p-va

• • 荧光定量PCR检测蛋白家族各成员时，有无必要先对扩增产物进行测序，以免李代桃僵？

  荧光定量PCR（Polymerase Chain Reaction）是一种用于快速检测和定量DNA或RNA的技术，可以在反应中引入荧光标记物，实时监测PCR产物的增加情况。对于蛋白家族各成员的检测，荧光定量PCR可以用于定量分析它们的相对表达水平，但并不能提供关于具体蛋白序列的信息。因此，对

• • 您好想要二维凝胶电泳的流程图

  我们可以提供二维凝胶电泳的主要流程供您参考： 1.样品准备：首先收集和准备需要进行电泳的蛋白质样品。 2.第一维：等电聚焦（IEF）：在第一维电泳中，利用蛋白质在一定pH范围内的等电点（pI，即蛋白质不带电的pH值），使蛋白质在电场中沿pH梯度运动，从而实现分离。

• • 请问提胞质胞核有具体实验方法吗

  以下是一种常用的从生物样品中提取细胞质和细胞核的方法，具体的细节可能会因实验的特性和目标而有所不同 ： a)样品制备：首先需要制备细胞悬液。这个过程通常包括将细胞从培养皿中剥离、洗涤和悬浮在适当的缓冲液中。 b)细胞离散化：使用酶解剂或机械方法将样品中的细胞离散开。对于动物组织，常

• • 蛋白质测序如何判断位位点？

  蛋白质测序中判断氨基酸残基的位点通常依赖于蛋白质序列的N端和C端信息，以及实验测序的结果。常用的方法有以下几种：1.Edman降解法：Edman降解法是一种经典的蛋白质测序方法，通过逐步去除N端的氨基酸并鉴定，逐渐确定蛋白质的N端序列。通过不断重复Edman降解步骤，可以获得蛋白质的完整N端

• • 质谱仪测氨基酸序列打碎多肽链后到底是怎么测序的，不应该是除了端位，剩下的都无法判断吗？

  质谱法是一种强大的工具，用于测量氨基酸序列。这种方法通常涉及到使用碰撞诱导解离（CID）或其他方法（如电子转移解离，ETD）将多肽链碎裂为较小的片段，然后通过测量这些片段的质量来推断原始蛋白质的氨基酸序列。质谱法的关键步骤包括：1.电离：首先，样品被电离，通常是通过电喷雾离子源（ESI）或者

• • 交联法蛋白相互作用分析有没有具体的实验方法？怎么选择交联剂？

  一、交联法蛋白相互作用分析的大致步骤主要包括交联反应、蛋白质分离和检测。以体外交联实验为例：1. 交联反应：首先将待分析的蛋白质溶液与交联剂混合，使其在适当的条件下进行交联反应。交联剂可以是化学交联剂或光敏交联剂。化学交联剂常用的有二氧化硅（DSS）、二氧化硫（Sulfo-EGS）等，光交联

• • 细菌发酵液经硫酸铵沉淀，过分子筛分离得到的一种蛋白，由于发酵液本身颜色较深，请问对N端测序有没有影响？

  对N端测序可能会受到细菌发酵液颜色深的影响。在蛋白质N端测序中，常使用Edman降解法进行测序，该方法是通过逐渐从N端氨基酸残基开始，逐个去除氨基酸并进行鉴定。然而，当发酵液本身颜色较深时，可能会影响到N端测序的准确性和可靠性。颜色深的发酵液可能含有一些色素或其他干扰物质，这些物质可能会影响