蛋白分析FAQ汇总

• • 过去五年左右蛋白质组学领域发生了什么变化？

  基因组学领域主要针对“遗传分子”DNA的基本组成进行测序，现已揭秘了有关活细胞以前未知的、非常重要的信息。最近一些关于基因型-表型之间关系、探索遗传特征和遗传病策略的最新研究结果在各种顶级科学期刊和文献大量报道。人类基因组测序完成的同时，许多物种譬如细菌、酵母和果蝇的基因组也已经完成测序，这

• • 蛋白质组学研究有哪些实际应用？

  蛋白质在生命系统中的重要性使其在生物医学领域的应用中十分广泛。在人体精密的调节功能体系中，各种蛋白质充当生命化学反应的催化剂、细胞生长介质、分子载体和受体以及针对微生物的免疫活性剂等。因此，各种人类疾病的本质都是由于蛋白质的浓度或结构发生了改变，发现疾病的蛋白质生物标志物可以引导设计出更好的

• • 如何准备和提交用于蛋白质分子量测定的样品？

  样品推荐： 建议样品体积中至少含有300pmol的蛋白质，在30μM的浓度下，体积约10μL，当然样品中所含蛋白质越多越好。样本应该是纯的，否则解卷积可能不起作用。 去污剂与质谱不兼容，必须在分析前从缓冲液中除去。去除缓冲液中的所有聚合物或去污剂（例如TritonX、NP-40、SDS或类似

• • 我该如何选择蛋白质样品LC-MS/MS分析的运行时间？

  如果您的蛋白样品只含单一蛋白质或含多达50个等摩尔质量的蛋白，并且需要进行蛋白质鉴定，则30分钟的运行时间就足够了。 如果您是IP样品，并期望检测出约100种蛋白质，那么我们建议60分钟的运行。 如果您期望寻找翻译后修饰位点（PTM），我们建议至少运行60分钟。 如果您的样品是含有数百种蛋白

• • 提交蛋白质样品进行质谱鉴定需要做什么？

  对于单个蛋白凝胶条带： 采用小型凝胶进行电泳并进行考马斯亮蓝染色。也可以使用SYPRO™ Ruby进行染色，但银染条带可能不能涵盖足够的蛋白质用于鉴定。通过与已知浓度的标记物进行比较来预估条带中的蛋白含量。染色时间不得超过15分钟。如果将凝胶染色太久，染料碎片会影响后续脱盐步骤。用干净的手术

• • 如何鉴定特异性修饰位点？

  我们需要您提供修饰后增加的确切质量以及目标蛋白的确切序列。相关服务:蛋白质翻译后修饰

• • 在研究磷酸化、乙酰化等翻译后修饰（PTM）时，如何制备样品？

  对于这类研究项目，我们通常采用3种酶的方法开展。即用3种不同的酶进行消化，以确保全范围覆盖。我们要求用户对感兴趣的目标条带进行3个泳道的电泳，并将3个泳道的蛋白条带收集到一个试管中。相关服务:蛋白质翻译后修饰

• • 如果想要进行N端/C端测序或蛋白质修饰鉴定，对样品有什么要求？

  我们需要您提供样品蛋白所有标签和修饰的确切序列。相关服务:蛋白质N/C端测序

• • 我应该提交多少蛋白质进行蛋白质鉴定或定量?

  对于溶液内消化样品的LC-MS/MS分析，所需的样品蛋白是基于BSA校准的Bradford法测定蛋白质的10倍，当然，也可以减少蛋白加样量，即在每次运行时将1 ug总蛋白注入到检测系统中，但由于制备过程中的样品损失而需要超量。 对于凝胶条带，如果是考马斯染色的凝胶上的可见条带，我们的阳性识别

• • 如何决定对裂解物或免疫沉淀物以溶液还是凝胶条带形式的样品进行分析?

  对于Label free非标定量分析，我们通常使用溶液内消化来限制样品间的变化量。用溶液样品进行消化和后续分析，还可以最大数量的获得蛋白定性“组分表”。该方法有助于避免因凝胶提取效率而产生的偏差，并在样品很少的情况下提高样品的原始灵敏度。因此，我们可以对蛋白质含量低至0.1 ug的样品进行溶