蛋白分析FAQ汇总

• • 如何制备蛋白质组学细胞样本？

  对于悬浮的细胞溶液：首先1000g，4℃离心5min，弃上清；再加入4℃预冷的PBS轻轻吹打洗涤沉淀后，1000g，4℃离心5min，重复三次，最后将细胞沉淀用液氮速冻，并于-80℃保存。如果是贴壁细胞：先弃掉培养基，再加入4℃预冷的PBS洗涤细胞，重复三次，最后一次用预冷的细胞刮棒轻轻的将

• • CO-IP拉下来的蛋白质谱没有检测到，是不是说明CO-IP实验失败了？

  不一定，因为质谱没有检测到目的蛋白可能是由于目的蛋白的丰度太低，质谱只能证明蛋白存在，不能证明不存在。相关服务:CO-IP免疫共沉淀法蛋白互作分析

• • SDS-PAGE分离蛋白的原理是什么？

  SDS-PAGE（sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis）十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳是Ulrich K. Laemmli开发的一种不连续电泳系统，常用于分离和鉴定分子量在250 kDa之内的蛋白质混合物。十

• • SDS-PAGE凝胶中各主要成分的作用分别是什么?

  丙烯酰胺：为蛋白质电泳提供载体；十二烷基硫酸钠(SDS)：去蛋白电荷、解离氢键、取消蛋白分子内的疏水作用、去折叠；TEMED与AP：促凝剂，加速聚丙烯酰胺的凝固；相关服务:SDS-PAGE蛋白质纯度分析

• • 如何提高SDS-PAGE电泳的分辨率？

  凝胶的质量影响电泳的分辨率，聚丙烯酰胺的充分聚合非常重要。建议待凝胶在室温凝固后，室温下放置一段时间再使用。相关服务:SDS-PAGE蛋白质纯度分析

• • SDS-PAGE电泳条带呈“微笑型”？

  主要是由于凝胶的中间部分凝固不均匀所致。相关服务:SDS-PAGE蛋白质纯度分析

• • SDS-PAGE电泳条带呈“皱眉型”？

  一般是两板之间的底部间隙气泡未排除干净所致。相关服务:SDS-PAGE蛋白质纯度分析

• • LC-MS中的保留时间是什么意思？

  保留时间（RT）是溶质通过色谱柱所用时间的量度。它被计算为从注射到检测的时间。化合物的RT不是固定的，因为即使使用相同的GC和色谱柱，许多因素也会影响它，如气体流速。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • LC-MS所需的最小样品量是多少？

  所需样品中约1mg，可以处于固态或液态。样品应纯净，不含溶剂和金属离子。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • LC-MS可以检测到哪些类型的化合物分子？

  LC-MS适用于极性和非极性化合物以及热不稳定分子的分析。这些化合物的范围从m/z值100000 Da的超高分子量蛋白质。相关服务:蛋白质质谱鉴定