蛋白分析FAQ汇总

• • 什么方法可以替代质谱法进行蛋白序列分析？

  传统N端Edman测序替代方法一次只能识别一种蛋白质，与质谱法相比灵敏度更低，成本更高。它具有提供N-末端的确定序列的优点，但如果蛋白质在N-末端被阻断，则不能使用（注：超过50%的真核生物蛋白质N末端被阻断）。相关服务:基于Edman降解的蛋白N端序列分析

• • 做蛋白质组学选择MALDI-TOF/TOF还是LC-MS/MS？

  如果条带是考马斯染色的，最快和最具成本效益的方法时通过质谱（MS/MS测序）进行蛋白质鉴定，并选择MALDI-TOF/TOF（PMF+MS/MS）质谱和自动数据库分析；如果条带是银染的或可能含有一种以上的蛋白质，灵敏度最高的是利用质谱（通过MS/MS测序）和电喷雾（LC-MS/MS）质谱进行

• • 为什么不推荐在总离子流图上标注物质？

  因为总离子流的一个峰并不代表一个物质。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • 如何从TIC图中找到目标物质的离子峰？

  结合保留时间以及质荷比进行寻找。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • 为什么用正离子模式能检测到，而用负离子模式检测不到？

  这与所检测的物质的性质相关，有些物质容易带正电荷，有些物质容易带负电荷，因此会存在在正离子模式能检测到而负离子模式检测不到的情况。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • 如何从凝胶上切割蛋白质条带/斑点？

  使用一个新的干净的刀片切出所需的蛋白质带/点。始终戴着手套在干净的玻璃板上切割凝胶。将凝胶片放入新 Eppendorf 管中。即可用于蛋白质鉴定分析。相关服务:蛋白胶点、胶条、IP样品蛋白质鉴定

• • 什么是角蛋白，如何避免样品被角蛋白污染？

  角蛋白是一种天然存在的蛋白质，存在于例如头发、死皮、乳胶手套、DTT、缓冲液和羊毛衣物中。通过穿着实验室服和非乳胶手套最大限度地减少角蛋白污染是必不可少的。此外，所有与凝胶接触的东西都应该没有灰尘，例如，用 70% 乙醇清洗。在干净的工作区域（如层流罩）进行凝胶内消化。相关服务:蛋白胶点、胶

• • 蛋白质鉴定的原理是什么？

  蛋白水解消化产生肽。如果在凝胶内消化，则从凝胶块中提取肽。在小规模 HPLC 材料上进行肽净化和浓缩。通过 MALDI 质谱或 ESI-LC 质谱进行 MS 和 MS/MS 分析。通过 Mascot (MatrixScience) 等软件搜索蛋白质氨基酸序列数据库。相关服务:蛋白鉴定

• • 什么是序列覆盖？

  序列覆盖表示通过质谱观察到的肽段中发现的蛋白质序列中氨基酸的数量。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • 你们能鉴定蛋白质修饰并进行更详细的蛋白质表征吗？

  我们提供多种翻译后修饰服务，包括二硫键分析和糖基化分析。除此之外，我们还提供物理化学和结构特性的测定。相关服务:翻译后修饰蛋白组分析