蛋白分析FAQ汇总

• • 质谱分析蛋白质的数量极限是多少？

  典型的质谱仪检测极限约为480fg，相当于约10amol或600万个50kDa的蛋白质分子（5KDa是人类蛋白质组的中位数分子量),当然不同质谱仪的检测上限是随灵敏度动态变化的。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • 如何读取质谱数据？

  1、鉴定分子离子：分子离子通常在质谱上表示为具有最高m/z比的峰；2、确定主要碎片集群；3、确定每个主峰的∆m；4、识别杂原子；5、识别分子的其他部分；6、对分子进行命名；7、对上述分析过程进行检查。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • 质谱中的M、Z表示什么？

  M代表分子质量，Z代表分子离子的电荷数，m/z表示质荷比，质谱图中的横轴以m/z为单位表示。由于GC-MS的z几乎总是1，因此m/z值通常被视为质量。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • 蛋白印迹电泳中条带出现歪斜是什么原因？

  可能是由于电转仪使用时间过长，没及时更换，导致海绵变薄，“三明治”结构松动。可以更换电转仪或者在两块海绵之间垫上草纸。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 为什么转膜后膜上出现白点？

  确认一下膜与胶块之间是否存在气泡。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 转膜过程中缓冲液温度高？

  可能是转膜过程中电压过高，或者是缓冲液的离子浓度太低导致的。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 为什么显影后胶片背景很高？

  造成显影背景高的原因很多，比如洗膜不充分、一抗特异性不强、二抗浓度过高以及曝光时间过长等。当背景很高时，可以从以上几方面进行排查。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 蛋白印迹实验中，跑完SDS-PAGE后条带很浅，有些甚至没有条带是什么原因？

  如果电泳过程没有问题的话，可以考虑样品中是否含有目标蛋白，或者是不是上样量太少。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • WB杂交信号太弱的原因？

  1、抗体浓度过低或者失效了；2、曝光时间过短；3、转膜效果不好，膜上的蛋白条带太浅。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • WB最后为什么会出现非特异性条带？

  这种非特异性条带可能是由于靶蛋白有多种翻译后修饰位点导致的一种正常现象，也有可能是由于操作不当导致的，比如一抗的特异性不高、一抗和二抗的浓度过高或者蛋白样品降解等。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务