蛋白分析FAQ汇总
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也许是因为温度控制不好、流动相发生变化以及柱子未平衡好。相关服务:蛋白质纯度分析(分子筛/反相色谱)
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1、流速发生变化-重新设定流速,使之保持稳定;2、泵中有气泡-通过排气等操作将气泡赶出;3、流动相不合适-改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合。相关服务:蛋白质纯度分析(分子筛/反相色谱)
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1、筛板堵塞或柱失效-反向冲洗柱子,替换筛板或更换柱子;2、存在干扰峰-改换流动相或更换选择性好的柱子;3、柱超载-减少进样量。相关服务:蛋白质纯度分析(分子筛/反相色谱)
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导致灵敏度不够的原因较多:1、样品量不足;2、样品未从柱子中流出;3、样品与检测器不匹配;4、检测器衰减太多;5、检测器时间常数太大;6、检测器池窗污染;7、检测池中有气泡;8、记录仪测压范围不当。;9、流动相流量不合适;10、检测器与记录仪超出校正曲线。相关服务:蛋白质纯度分析(分子筛/反
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• 我需要培养/收获多少个细胞才能获得足够的蛋白质用于质谱分析?
这实际上取决于您的目标蛋白质的丰富程度。一般来说,您需要使用比用于蛋白质印迹更多的裂解物进行质谱分析。一个合理的起点可能至少是您用于蛋白质印迹的量的 10 倍,但可能需要进一步扩大量才能看到目标蛋白质。相关服务:蛋白质质谱鉴定
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• 如果我在凝胶上看到一条漂亮的条带,我可以预期只从蛋白鉴定中看到一种蛋白质,对吧?
不。我们几乎总是能够在 IP 实验中从凝胶上切下的每个条带中鉴定出几种蛋白质。相关服务:蛋白胶点、胶条、IP样品蛋白质鉴定
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• 如果我在列表中看到一个有趣的蛋白质,这意味着它确实存在于我的样本中,对吗?
不。实际上这意味着蛋白质可能存在,列表中“较高”的蛋白质更有可能存在,而较低的蛋白质不太可能存在,主要取决于总分和匹配的肽的分数。分数高于 200 的蛋白质几乎可以肯定是“真实的”,但随着分数的下降,假阳性的可能性会增加。我们通常会审查您感兴趣的较弱的命中,以尝试对假阳性风险进行分层。弱匹配
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是的,对于 N-糖肽测序,工作流程是成熟和标准化的,并且 N-糖基化序列是众所周知的。因此,糖基化位点的验证很简单。然而,O-连接聚糖比 N-连接聚糖更不稳定,因此糖基化位点的验证比 N-连接聚糖更困难,并且需要更多时间和关键碎片离子的存在。相关服务:糖组学分析服务
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为了获得蛋白质上糖基化的完整概况,糖蛋白的纯度至关重要,因为糖肽比普通肽更大且更难电离。如果糖蛋白是混合物中的主要成分,则 10-50 µg 的蛋白质足以进行分析。如果没有,请联系我们以获取更多指导。相关服务:糖组学分析服务
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糖蛋白组规模研究需要富集步骤、数据分析能力和更好的实验计划。如果您有任何要求,请与我们联系。相关服务:糖组学分析服务
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