蛋白分析FAQ汇总

• • Western blot实验中，选择TBS和PBS缓冲液？

  TBS和PBS缓冲液都可用于WB分析，只是要根据需要选择合适的浓度。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 做WB实验时可不可以同时加多种一抗？

  通常情况下都是只加一种一抗。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • PVDF和NC膜有何不同？

  PVDF膜价格较贵，可重复使用，结合能力较强。NC膜价格比较便宜，应用较广，结合牢固性较PVDF膜差，韧性也不如PVDF，不能重复使用，但蛋白吸附容量高，亲水性较好。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • WB的一抗用单抗还是多抗好？

  理论上单抗的特异性优于多抗，但是单抗的种类较少而且价格偏高，所以多抗的应用要多一些。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 运行凝胶时我应该做些什么特殊的事情？

  首先，应该为这个实验补充新鲜的运行缓冲液。大多数实验室使用商业预制凝胶，只要它们没有超过保质期，通常就可以。相关服务:蛋白胶点、胶条、IP样品蛋白质鉴定

• • 我需要多少样本才能获得良好的鉴定？

  一个好的经验法则是使用考马斯亮蓝或银染有一个可见的条带，或至少 10-100 fmol 的蛋白质。在某些情况下，我们常用的蛋白酶（胰蛋白酶）不适合您的蛋白质；对于小蛋白质来说，这更有可能。在这种情况下，将需要更多的蛋白质或可能需要不同的酶。相关服务:蛋白鉴定

• • 我的样本做蛋白质印迹有一个不错的单一条带。这可以测序吗？

  如果您使用典型的凝胶染色剂看不到它，则可能没有足够的蛋白质来鉴定，并确保您切割的正确的条带。此外，WB 只能看到您感兴趣的蛋白质，因此很可能也存在许多干扰蛋白质，通过WB你根本看不到他们。此外，如果您在凝胶上运行全细胞裂解物，印迹它，然后运行蛋白质印迹，即使您使用非蛋白质封闭剂，我们也几乎不

• • 我的样品似乎都是角蛋白。我能做些什么？

  角蛋白通常来自人为污染，几乎可以在样品处理过程的任何时候引入。建筑物内的灰尘通常主要是人体皮肤薄片，因此小心避免灰尘会有所帮助。保持样品盖好、仔细清洁所有接触样品的玻璃器皿和塑料器皿、戴上无粉手套、不要徒手接触样品（或样品溶液）、避免使用公用试剂以及使用专用设备都有助于减少角蛋白污染。相关服

• • 机构采取哪些步骤来控制角蛋白？

  我们非常密切地监测正在进行的样品分析中的角蛋白水平，并在我们怀疑有问题时立即中断样品队列。我们使用的试剂是大批量制备的、分装的、冷冻的，并仔细测试了性能和污染。我们的大部分操作都是在标准的 2 级罩中进行的，以减少污染。我们通常仍然可以在我们自己准备和处理的样品中检测到低水平的角蛋白，但将角

• • 我的样品含有 β-乳球蛋白和其他乳蛋白。我能做些什么？

  您的实验室可能进行了大量蛋白质印迹使用的脱脂牛奶，因此许多玻璃和塑料器具可能被乳蛋白污染。尽管这可能对您的 WB 有所帮助，但它使质谱分析变得困难，因为质谱仪将“看到”来自所有这些蛋白质的肽段。玻璃器皿在被蛋白质严重饱和后很难得到足够的清洁，一个简单的解决方案是获取一些关键设备并将它们仅用于