蛋白分析FAQ汇总

• • 蛋白质样品制备需要注意什么？

  质谱法鉴定蛋白质样品具有很高的灵敏度。过程中引入的微量外来污染蛋白也很可能被质谱鉴定，这对蛋白质测序分析的准确性有很大影响。因此，在质谱样品的制备过程中，应使用清洁、无污染的容器。应使用纯度达到质谱水平的试剂。使用的溶液需要新鲜制备，并应戴上手套和头巾，以避免样品的角蛋白污染。相关服务:蛋白

• • 各类蛋白质测序制备有哪些要求？

  一般来说，考马斯亮蓝和 SYPRO Ruby 染色的蛋白质条带与 用SDS-PAGE 凝胶分离蛋白质样品的质谱法非常兼容。但是对于银染蛋白，不能使用戊二醛作为固定剂，这会影响后续的质谱分析。此外，蛋白质干粉和蛋白质也可以进行样品测序。如果蛋白质溶液的浓度较低，在制备样品的过程中要尽量减少SD

• • 在典型的蛋白质鉴定中序列覆盖率是多少？

  通常，每个蛋白质的序列覆盖率在 10% 到 90% 之间，这取决于蛋白质丰度和蛋白质性质。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • 获得不良质谱数据的最常见原因是什么？

  原因包括：1. 使用与质谱检测不兼容的染色方法；2. 样品中存在离子抑制试剂，如聚合物、去污剂和甘油；3. 污染蛋白过多，如亲和纯化中的抗体，血清样品中的高丰度蛋白；4. 蛋白质特性；例如，有大量修饰的蛋白质，特定蛋白质中的赖氨酸和精氨酸残基很少。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • 如何避免角蛋白污染？

  角蛋白是最常见的蛋白质污染物，主要来自人体皮肤和头发，有时也来自羊毛衫等衣服。以下是避免样品角蛋白污染的提示：1. 在表面干净的干净实验室工作；2. 使用密闭盒中的移液器吸头和微量离心管；3、使用前用干净水冲洗设备（瓶子、玻璃板、电泳设备、染色盘）；4. 在样品制备和水解过程中始终戴手套。切

• • de novo 结果中的 TLC 和 ALC 分数是什么意思？

  局部置信度是特定氨基酸存在于从头肽中特定位置的置信度，它以百分比表示。总局部置信度(Total Local Confidence，TLC)是肽序列中每个氨基酸的局部置信度得分(0到1)的总和。平均局部置信度(Average Local Confidence，ALC)是 TLC 的平均值，它是

• • 良好的从头测序结果如何截止？

  通常你会发现好的肽段在 55% 及以上。这并不意味着整个序列都是正确的序列。这是因为在从头测序时，由于这些碎片产生的离子质量高/质量低，所以更难解析谱的起点和终点。这就是我们在结果中添加颜色编码的原因，这样您就可以看到序列中的哪个位置具有更高的置信度。相关服务:从头测序

• • 为什么我不能进行无标签定量？

  最可能的原因是用户必须至少有两个样本并且每个样本中的片段数量相同。相关服务:定量蛋白组分析

• • 对于未知蛋白质，如果蛋白质的N端环化或N端有未知修饰，如何准确分析蛋白质序列？

  对于序列未知的蛋白质，尤其是工程重组蛋白质、体外合成蛋白质、工程抗体，或基因序列尚未研究过的蛋白质，其信息往往不包含在蛋白质数据库中。为了实现对此类蛋白质序列的准确分析，必须使用蛋白质从头测序。蛋白质从头测序是一种基于质谱的分析方法。与传统的质谱方法类似，从头测序法也是先将蛋白质切成小的多肽

• • 哪种类型的GC检测器最常用?

  FID是气相色谱中最常用的检测器。FID对含有碳原子(C)的化合物敏感，并且能够检测到，而碳原子几乎存在于所有有机化合物中。相关服务:蛋白质质谱鉴定