蛋白分析FAQ汇总

• • 双向凝胶电泳与质谱联用鉴定蛋白大致过程有哪些？

  首先对凝胶图谱进行差异扫描分析，找到差异蛋白点并切下，然后对蛋白胶点进行脱色、溶解、蛋白提取、酶解消化和质谱检测，再对质谱下机数据进行搜库分析，对差异蛋白进行定性定量鉴定。相关服务:蛋白胶点、胶条、IP样品蛋白质鉴定

• • 目前可进行蛋白全谱分析的物种有哪些？

  理论上所有的物种均可进行蛋白全谱分析。蛋白全谱分析需要对应物种的蛋白质数据库作为支持，对于已进行全基因组测序的物种来说，进行蛋白全谱分析不是难题，对于缺乏基因组数据库的物种来说，可以用近缘物种或者所在科属的数据库作为支持。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • 有9个样品，如何做iTRAQ？

  在一次实验中，iTRAQ可以同时标记4至8个样品，当样品数量超过8时不能在一次实验中用试剂盒同时标记，此时可以进行生物学重复来完成9个样品的标记，不建议用两种试剂盒分别标记。相关服务:基于标签的蛋白质定量技术-iTRAQ，TMT， SILAC

• • 为什么肽样品需要在上样柱前进行预处理？制备方法有哪些？

  制备柱更容易被污染，因为相比较分析柱而言处理的样品更多。 因此，需要对样品进行预处理以延长色谱柱的使用时间。 主要有五种方法：过滤、离心、柱前过滤和在线过滤。相关服务:肽纯度分析

• • 蛋白质谱鉴定不成功的原因一般有哪些？

  蛋白含量过低和酶解或质谱操作失误导致的质谱效果不好/缺乏可参考的蛋白数据库。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • 凝胶内的蛋白样品是否可以长期保存？

  如果保存时间超过一周，可以将蛋白条带切取后放入-20℃或者-80℃冰箱保存；如果小于一周，则可以常温保存。相关服务:凝胶及图像分析

• • 凝胶内的蛋白样品如何运输？

  一般将样品常温快递运送即可。相关服务:凝胶及图像分析

• • 凝胶内的蛋白样品对质谱鉴定有何影响？

  基本不会影响后续质谱鉴定效果。相关服务:凝胶及图像分析

• • iTRAQ/TMT技术相对于电泳技术有什么优势？

  相较于2-DE以及DIGE等基于电泳的技术，iTRAQ/TMT分辨率高，可提供成百上千的蛋白定性定量信息；其次通量高，可一次性对多个样品进行试验，特别适合于多组样品间的同时比较以及生物学过程的动态检测。相关服务:基于标签的蛋白质定量技术-iTRAQ，TMT， SILAC

• • iTRAQ/TMT实验的主要步骤有哪些？

  主要步骤包括蛋白提取、浓度及纯度测定、蛋白酶解、同位素标记、高效液相色谱分离、高分辨LCMSMS质谱检测、搜库定性定量分析、差异蛋白筛选、差异蛋白生信分析以及中英文结题报告整理。相关服务:基于标签的蛋白质定量技术-iTRAQ，TMT， SILAC