蛋白分析FAQ汇总
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可能是由于有非特异性蛋白结合或转移膜上的非特异性吸附等原因导致的。相关服务:CO-IP免疫共沉淀法蛋白互作分析
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常用的Co-IP抗体主要有单克隆抗体、单克隆抗体群和多克隆抗体等,他们的优缺点各有不同,在实际选择时,要根据具体的实验条件和目的来决定。相关服务:CO-IP免疫共沉淀法蛋白互作分析
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角蛋白主要来源于皮肤屑和头皮屑,在染色、脱色、切胶和酶解过程中容易在蛋白样本中引入角蛋白,因此实验过程中一定要穿戴干净的手套、口罩和实验服,仔细清洗实验器皿。相关服务:蛋白质质谱鉴定
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蛋白定性定量鉴定;精确分子量鉴定;氨基酸序列分析;二硫键分析;蛋白翻译后修饰类型、水平和位点分析。相关服务:蛋白质质谱鉴定
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用剪断尖端的0.2ml吸头配合移液器将蛋白胶点吸出,并转移到0.5ml干净的EP管中,用去离子水或双蒸水冲洗珠子两到三次,然后吸干管子。 相关服务:蛋白胶点、胶条、IP样品蛋白质鉴定
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串联质谱鉴定通常将质谱数据在数据库进行检索以获得结果;而质谱测序需要计算质谱图中相邻离子峰的分子量差异来确定氨基酸序列。相关服务:蛋白质质谱鉴定
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• 蛋白质鉴定服务——应该选择 MALDI TOF/TOF 还是 LC-MS/MS?
如果条带是考马斯染色,则使用:质谱法(通过 MS/MS 测序)鉴定蛋白质并选择具有自动数据库分析的 MALDI-TOF/TOF (PMF+MS/MS) 质谱。这是最快、最具成本效益的方法,也是考马斯染色凝胶和 2D 凝胶斑点的最佳选择。 如果条带为银染或可能包含一种以上的蛋白质,请使用:质谱
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蛋白质鉴定是通过将肽片段模式与公共数据库中的序列相匹配来实现的。这对于人类、小鼠、水稻、拟南芥、水果等来说是理想的。如果样品来自与已知基因组高度相似的生物体,则可以获得良好的结果。相关服务:蛋白分析
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有两个主要关注点: 覆盖率:质谱技术能否提供高序列覆盖率?覆盖率越高,检测和鉴定含有修饰基团的肽的统计机会就越大。 修饰位点的占有率:蛋白质被修饰的百分比是多少?如果它很低,那么检测到修饰肽的机会就会降低。如果占有率很高(>30%),那么这有利于鉴定修饰位点。相关服务:磷酸化定量蛋白组学研究
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首先,请注意,由于其独特的序列,每种蛋白质都有不同的潜力以高序列覆盖率被定位。 所有蛋白质的覆盖率通过以下方式增加:a) 从更大量的蛋白质开始(需要大于 5 μg 的蛋白质)进行质谱分析;b) 确保蛋白质是纯的;c) 使用多种质谱仪器/技术进行分析将增加覆盖率;d) 使用 TiO2 柱富集磷
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