蛋白分析FAQ汇总

• • 我需要多少样本才能获得良好的鉴定？

  一个好的经验法则是使用考马斯亮蓝或银染有一个可见的条带，或至少 10-100 fmol 的蛋白质。在某些情况下，我们常用的蛋白酶（胰蛋白酶）不适合您的蛋白质；对于小蛋白质来说，这更有可能。在这种情况下，将需要更多的蛋白质或可能需要不同的酶。相关服务:蛋白鉴定

• • 我的样本做蛋白质印迹有一个不错的单一条带。这可以测序吗？

  如果您使用典型的凝胶染色剂看不到它，则可能没有足够的蛋白质来鉴定，并确保您切割的正确的条带。此外，WB 只能看到您感兴趣的蛋白质，因此很可能也存在许多干扰蛋白质，通过WB你根本看不到他们。此外，如果您在凝胶上运行全细胞裂解物，印迹它，然后运行蛋白质印迹，即使您使用非蛋白质封闭剂，我们也几乎不

• • 我的样品似乎都是角蛋白。我能做些什么？

  角蛋白通常来自人为污染，几乎可以在样品处理过程的任何时候引入。建筑物内的灰尘通常主要是人体皮肤薄片，因此小心避免灰尘会有所帮助。保持样品盖好、仔细清洁所有接触样品的玻璃器皿和塑料器皿、戴上无粉手套、不要徒手接触样品（或样品溶液）、避免使用公用试剂以及使用专用设备都有助于减少角蛋白污染。相关服

• • 机构采取哪些步骤来控制角蛋白？

  我们非常密切地监测正在进行的样品分析中的角蛋白水平，并在我们怀疑有问题时立即中断样品队列。我们使用的试剂是大批量制备的、分装的、冷冻的，并仔细测试了性能和污染。我们的大部分操作都是在标准的 2 级罩中进行的，以减少污染。我们通常仍然可以在我们自己准备和处理的样品中检测到低水平的角蛋白，但将角

• • 我的样品含有 β-乳球蛋白和其他乳蛋白。我能做些什么？

  您的实验室可能进行了大量蛋白质印迹使用的脱脂牛奶，因此许多玻璃和塑料器具可能被乳蛋白污染。尽管这可能对您的 WB 有所帮助，但它使质谱分析变得困难，因为质谱仪将“看到”来自所有这些蛋白质的肽段。玻璃器皿在被蛋白质严重饱和后很难得到足够的清洁，一个简单的解决方案是获取一些关键设备并将它们仅用于

• • 我的样本有太多来自免疫沉淀的抗体。我怎样才能摆脱它们？

  有几种可能的策略可以减少 IP 洗脱中的抗体量。一种是尽可能使用竞争性洗脱，例如使用抗原肽（例如FLAG、Myc）。另一种是使用共价结合的抗体。如果您使用的是带有 His 标签的构建体，最后一步可以是金属柱而不是抗体。相关服务:蛋白分析

• • 如何优化我的 IP 以获得更好的鉴定结果？

  您可以执行试用 IP 并通过 WB 对其进行监控。一个目标是尽可能多地拉下目标蛋白，这可以通过对上清液进行 WB 来评估。然后，尽可能多地从珠子上洗脱，再次由 WB 确定，最后一步可以使用热 SDS-PAGE 上样缓冲液从珠子上进行多次洗脱。最后按比例放大并尝试银或胶体考马斯染色凝胶。希望您

• • 利用LCMS绘制蛋白组组学图谱需要多少蛋白质？

  1D LC：20μg纯蛋白质。 2D LC：100-200μg纯蛋白质；但是，如果样品需要额外的清洁，我们建议200-500μg。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • LCMS可以分析什么类型的样品？

  基本上任何蛋白质样品，如细胞裂解物，整个组织，分泌的蛋白质，但不是放射性样品。（注意：分泌的样品必须使用血清/血浆游离培养基。）相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • 进行LCMS分析，样品的最大体积是多少？

  样品体积最多不超过250μL。相关服务:蛋白质质谱鉴定