蛋白分析FAQ汇总

• • Gst pull-down目的蛋白洗脱不下来？

  检查洗脱液的体积、缓冲液中谷胱甘肽浓度及离子强度是否过低。相关服务:GST pull-down蛋白相互作用分析

• • 为什么Gst pull-down洗脱的蛋白中有杂质?

  可能时细胞破碎时超声处理过度、分子伴侣被共纯化以及GST融合蛋白被蛋白酶部分降解等原因造成的。相关服务:GST pull-down蛋白相互作用分析

• • 蛋白质N端测序样品有什么要求？

  1、纯度：>95（基于摩尔数）；2、含量：50-100 pmol(液体体积控制在20ul)；3、修饰封闭：N 端未被封闭；4、样品形式：液体、干粉或PVDF膜；5、无干扰物如蛋白酶、氨基酸、胺、盐分、乙醛和去污剂等。相关服务:基于Edman降解的蛋白N端序列分析

• • 进行N端测序需要提供哪些样品信息？

  纯度、样品可能修饰情况、制备方法、验证目的以及表观分子量。相关服务:基于Edman降解的蛋白N端序列分析

• • 液体蛋白样品进行N末端测序有什么要求？

  对于溶剂的要求：不可含有氨盐、Tris等、 1 级或2级胺的盐溶液以及SDS。相关服务:基于Edman降解的蛋白N端序列分析

• • PVDF膜蛋白样品进行N末端测序有什么要求？

  1、样品量：5-8 条泳道，每条泳道的样品尽量用最高浓度样品，上最大体积（尽量使条带长胖为正常的 2-3 倍宽度）；2、硝酸纤维素膜：具有耐药性，不能使用；3、在电转印中使用的缓冲液尽可能不含甘氨酸；4、染色剂推荐使用考马斯亮蓝。相关服务:基于Edman降解的蛋白N端序列分析

• • 用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移？

  也许是因为温度控制不好、流动相发生变化以及柱子未平衡好。相关服务:蛋白质纯度分析（分子筛/反相色谱）

• • 用HPLC进行分析时保留时间发生快速变化是什么原因？

  1、流速发生变化-重新设定流速，使之保持稳定；2、泵中有气泡-通过排气等操作将气泡赶出；3、流动相不合适-改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合。相关服务:蛋白质纯度分析（分子筛/反相色谱）

• • HPLC峰拖尾或出现双峰的原因是什么？

  1、筛板堵塞或柱失效-反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子；2、存在干扰峰-改换流动相或更换选择性好的柱子；3、柱超载-减少进样量。相关服务:蛋白质纯度分析（分子筛/反相色谱）

• • HPLC灵敏度不够的主要原因？

  导致灵敏度不够的原因较多：1、样品量不足；2、样品未从柱子中流出；3、样品与检测器不匹配；4、检测器衰减太多；5、检测器时间常数太大；6、检测器池窗污染；7、检测池中有气泡；8、记录仪测压范围不当。；9、流动相流量不合适；10、检测器与记录仪超出校正曲线。相关服务:蛋白质纯度分析（分子筛/反