蛋白分析FAQ汇总

• • 常用的WB染色剂有哪些？

  1、阴离子染料如氨基酸黑、考马斯亮蓝和丽春红S等；2、胶体金；3、生物素。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 如何解决WB实验中大分子量蛋白转移效率低？

  可以在转移缓冲液中加入终浓度20%甲醇或终浓度0.1%SDS、选用优质的转移膜、提高转移时的电压电流和时间等。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 免疫沉淀IP实验背景高的原因？

  与CO-IP类似，造成背景高的原因可能是去污剂不溶性蛋白有残留、洗涤不充分、非特异性蛋白质与珠子结合、使用的抗体特异性不强、蛋白与抗体非特异性结合、蛋白样品降解等。相关服务:CO-IP免疫共沉淀法蛋白互作分析

• • IP没有检测到目的蛋白？

  所用样品中不表达或低水平表达目标蛋白、没有足够的抗体捕获目标蛋白、目标蛋白没有从珠子上洗脱、抗体没有结合免疫吸附磁珠、使用的裂解液不正确等。相关服务:CO-IP免疫共沉淀法蛋白互作分析

• • IP实验中如何避免轻重链的干扰？

  一般情况下可以选择不同种属来源的一抗分别进行IP和WB实验，然后再选择无种属交叉反应的二抗进行WB实验。相关服务:CO-IP免疫共沉淀法蛋白互作分析

• • IP实验显影信号弱是什么原因？

  可能是由于显影液或底物失效、二抗孵育过多造成的。相关服务:CO-IP免疫共沉淀法蛋白互作分析

• • IP实验显影过强或太弱是什么原因？

  显影过强-上样量大；显影太弱-上样量小。相关服务:CO-IP免疫共沉淀法蛋白互作分析

• • IP实验背景杂乱且可见大片黑色区域是什么原因？

  可能是一抗的浓度过高或孵育的时间太久。相关服务:CO-IP免疫共沉淀法蛋白互作分析

• • 为什么IP泳道有目的条带但input泳道没有？

  目的蛋白浓度不高时可能出现这种情况，因为IP能浓缩富集而WB不能。相关服务:CO-IP免疫共沉淀法蛋白互作分析

• • Gst pull-down目的蛋白结合效率低？

  这种情况可以考虑蛋白序列出现移码等错误、GST 融合蛋白被机械裂解的方法变性（比如超声）、GST 融合蛋白发生聚集沉淀、GST融合蛋白被过度稀释、结合缓冲条件不适宜等。相关服务:GST pull-down蛋白相互作用分析