蛋白分析FAQ汇总

• • 将蛋白样品转移到哪种膜比较好？

  用于蛋白质测序的SequiBlot PVDF膜（0.2μm）。相关服务:基于Edman降解的蛋白N端序列分析

• • 蛋白样品在凝胶中，可以进行N端测序吗？

  不可以，必须转移到序列级PVDF膜上。相关服务:基于Edman降解的蛋白N端序列分析

• • 样品能否以液体形式进行N端测序分析？

  可以，前提是样品是纯的并且在低盐缓冲液中，例如50毫米碳酸氢铵；对于TRIS或磷酸盐缓冲液，最大盐强度为20mM。NaCl、表面活性剂（如SDS）和甘氨酸不能存在。装运前，样品必须在微型离心管中冷冻干燥或冻干。相关服务:基于Edman降解的蛋白N端序列分析

• • 做N端测序需要多少蛋白质？

  对于纯蛋白，灵敏度限约为1pmol，但建议提供10pmol以确保满意的结果。若为考马斯染色的目标带必须肉眼可见。相关服务:基于Edman降解的蛋白N端序列分析

• • 什么是N端封闭？

  在生理状态下蛋白质的N末端残基发生翻译后修饰的现象。这是一个发生在细胞中的生物过程，通常不是样品制备过程。常见的N-末端封闭基团包括焦谷氨酸、N-乙酰基如乙酰丝氨酸或乙酰苏氨酸和N-甲酰化氨基酸。相关服务:基于Edman降解的蛋白N端序列分析

• • 可以解除蛋白质的N端封闭修饰吗？

  几乎是不可能的。相关服务:基于Edman降解的蛋白N端序列分析

• • 在典型的蛋白质质谱鉴定中获得的序列覆盖率是多少？

  通常每种蛋白质的序列覆盖率在10%到90%之间，这取决于蛋白质丰度和蛋白质性质。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • 获得较差质谱数据的最常见原因是什么？

  1、使用与质谱检测不兼容的染色方法； 2、样品中存在离子抑制试剂，如聚合物、洗涤剂、甘油等；3、过量使用亲和纯化的抗体、血清样品中的高丰度蛋白等污染蛋白；4、蛋白质特异性，例如，重度修饰的蛋白质，特定蛋白质中很少的赖氨酸和精氨酸残基。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • 从单个凝胶条带中可以鉴定出多少蛋白质？

  这取决于上样在凝胶上加载的样品的复杂度。根据我们的经验，当在12%T minigel上运行复合细胞裂解物时，我们已经从单个凝胶条带中鉴定出多达70种蛋白质。我们强烈建议不要使凝胶过载，因为它会影响蛋白质的分辨率和分离。此外，它可能导致LC中大量肽的“残留”，从而在不同样品中重复鉴定相同的蛋白

• • 可以提交银染的胶条进行质谱鉴定吗？

  如果使用的银染过程中使用的是与质谱兼容的试剂是可以的。相关服务:蛋白胶点、胶条、IP样品蛋白质鉴定