蛋白分析FAQ汇总

• • IP没有检测到目的蛋白？

  所用样品中不表达或低水平表达目标蛋白、没有足够的抗体捕获目标蛋白、目标蛋白没有从珠子上洗脱、抗体没有结合免疫吸附磁珠、使用的裂解液不正确等。相关服务:CO-IP免疫共沉淀法蛋白互作分析

• • IP实验中如何避免轻重链的干扰？

  一般情况下可以选择不同种属来源的一抗分别进行IP和WB实验，然后再选择无种属交叉反应的二抗进行WB实验。相关服务:CO-IP免疫共沉淀法蛋白互作分析

• • IP实验显影信号弱是什么原因？

  可能是由于显影液或底物失效、二抗孵育过多造成的。相关服务:CO-IP免疫共沉淀法蛋白互作分析

• • IP实验显影过强或太弱是什么原因？

  显影过强-上样量大；显影太弱-上样量小。相关服务:CO-IP免疫共沉淀法蛋白互作分析

• • IP实验背景杂乱且可见大片黑色区域是什么原因？

  可能是一抗的浓度过高或孵育的时间太久。相关服务:CO-IP免疫共沉淀法蛋白互作分析

• • 为什么IP泳道有目的条带但input泳道没有？

  目的蛋白浓度不高时可能出现这种情况，因为IP能浓缩富集而WB不能。相关服务:CO-IP免疫共沉淀法蛋白互作分析

• • Gst pull-down目的蛋白结合效率低？

  这种情况可以考虑蛋白序列出现移码等错误、GST 融合蛋白被机械裂解的方法变性（比如超声）、GST 融合蛋白发生聚集沉淀、GST融合蛋白被过度稀释、结合缓冲条件不适宜等。相关服务:GST pull-down蛋白相互作用分析

• • Gst pull-down目的蛋白洗脱不下来？

  检查洗脱液的体积、缓冲液中谷胱甘肽浓度及离子强度是否过低。相关服务:GST pull-down蛋白相互作用分析

• • 为什么Gst pull-down洗脱的蛋白中有杂质?

  可能时细胞破碎时超声处理过度、分子伴侣被共纯化以及GST融合蛋白被蛋白酶部分降解等原因造成的。相关服务:GST pull-down蛋白相互作用分析

• • 蛋白质N端测序样品有什么要求？

  1、纯度：>95（基于摩尔数）；2、含量：50-100 pmol(液体体积控制在20ul)；3、修饰封闭：N 端未被封闭；4、样品形式：液体、干粉或PVDF膜；5、无干扰物如蛋白酶、氨基酸、胺、盐分、乙醛和去污剂等。相关服务:基于Edman降解的蛋白N端序列分析