蛋白分析FAQ汇总

• • MRM 与绝对或相对定量兼容吗？

  该技术可以为任一类型的定量提供结果。相对定量通常很简单，但对于绝对定量，需要适当的标准。对于绝对定量，针对加标的内标（例如合成的稳定同位素标记的肽内标）对特定肽进行定量，以测量蛋白质浓度。相关服务:MRM/PRM定量蛋白组学分析

• • 是否需要方法开发？

  是的。每个项目都是特定的，需要大量的操作时间来开发和运行 MRM 分析。对于复杂的混合物，一些样品可能需要用色谱分离进行净化。对于血浆和血清，需要进行额外的准备工作，并将收取额外费用。相关服务:MRM/PRM定量蛋白组学分析

• • 蛋白质组定量分析需要多少蛋白质？

  iTRAQ 实验的最佳用量是 50 µg 标记蛋白。样品净化过程中的损失可能相当大，并且这是特定于样品的。因此，我们建议提供 200-500µg 的样品，更多的量将提高对低丰度蛋白质的敏感性。相关服务:定量蛋白组分析

• • 什么类型的样品可以进行蛋白质组定量分析？

  细胞裂解物，分泌的蛋白质样品，但不能是放射性样品。注意：分泌的样本必须在无血清/无血浆的培养基中。相关服务:定量蛋白组分析

• • 蛋白质组定量分析样品的最大体积是多少？

  样品体积必须小于 250 µL。相关服务:定量蛋白组分析

• • 可以使用蛋白酶抑制剂吗？

  可以，蛋白酶抑制剂将减少蛋白质降解。相关服务:蛋白分析

• • 正在查看的蛋白质组在当前可用的数据库中存在是否重要？

  是的，因为蛋白质组分析不适用于未知基因组的样本。相关服务:组学分析

• • 从一条凝胶条带中可以鉴定出多少种蛋白质？

  这取决于加载在凝胶上的样品的复杂性。根据我们的经验，我们已经从复杂的细胞裂解物在 12%T minigel 上运行后的一条凝胶条带中鉴定出多达 70 种蛋白质。我们强烈建议不要使凝胶过载，因为它会影响蛋白质的分辨率和分离。此外，它可能导致 LC 中大量肽的“携带”，从而导致在不同样品中重复鉴

• • 可以提交银染凝胶吗？

  可以，如果它是通过质谱兼容的银染流程染色的。许多商业供应商出售此类试剂盒。相关服务:蛋白胶点、胶条、IP样品蛋白质鉴定

• • 是仅使用胰蛋白酶消化蛋白质还是可以使用其他蛋白质水解酶？

  如果要对样品进行“溶液内消化”，可以使用市售的测序级蛋白水解酶中的任何一种或组合。对于“凝胶内消化”，可用蛋白水解酶变得更加有限。请注意，许多高分子量酶在凝胶内消化方面的效率不如胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶。相关服务:蛋白分析