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• • 测定磷酸化的位点

  -蛋白质磷酸化是一个通过蛋白激酶催化将ATP的磷酸基团转移到底物的氨基酸残基（丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸）上或者在信号作用下结合GTP的过程，其在细胞信号转到过程中起重要作用，是生物体内一种较为普遍的调节方式。

• • Pull-down silver stain

  -银染（silver stain）是对聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质进行染色的过程，在碱性条件下，甲醛可以将蛋白带上的硝酸银（银离子）还原成金属银，使银颗粒沉积在蛋白带上而染色。染色的程度与蛋白中的一些特殊的基团有关，不含或者很少含半胱氨酸残基的蛋白质有时候呈负染。

• • IP/Co-IP/Pull-down差别在哪

  -免疫沉淀（IP）和免疫共沉淀（Co-IP）是纯化富集目的蛋白和确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法，Pull-down与Co-IP的原理类似，均是利用亲和配体捕获互作蛋白，那么IP/Co-IP/Pull-down差别在哪？

• • Co-IP实验与Pull-down实验有什么不同

  -免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法，用于确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用。Pull-down 技术又称蛋白质体外结合实验（Binding assay in vitro）， 是一

• • Pull-down,质谱

  -质谱是蛋白互相作用研究中的蛋白质“检测器”，一般的质谱技术是不能直接研究蛋白互相作用的，需要和其他技术联用检测（如常见的免疫共沉淀和Pull-down等技术），然后再分析纯蛋白或者复合蛋白样品中存在的具体蛋白，甚至于可以比较不同样本中具体蛋白的相对丰度并寻找差异蛋白。

• • 蛋白互作分析Pull-down

  -Pull-down 技术又称蛋白质体外结合实验（Binding assay in vitro）， 是一种行之有效的验证酵母双杂交系统的体外试验技术，蛋白互作分析Pull-down可用于初步研究两种蛋白质的相互作用分析。

• • 蛋白纯化pull-down

  -GST pull-down实验的基本原理是将靶蛋白-GST融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上，作为与目的蛋白亲和的支撑物，充当一种“诱饵蛋白”，然后目的蛋白溶液过柱，可从中捕获与之相互作用的“捕获蛋白”（目的蛋白），洗脱结合物后通过SDS-PAGE电泳分析，从而证实两种蛋白间的相互作用或

• • HCP覆盖率检测

  -生物技术药物往往是借助工程细胞进行大规模生产，在生产过程中，这些宿主细胞会分泌其他蛋白质，伴随着细胞老化破裂产生的大量胞内蛋白等，形成与产品不相关的杂质，统称为宿主细胞蛋白质（host cell protein，HCP）。HCP的存在可能导致产品不稳定、疗效差等质量风险，还能引发病人的免疫

• • hcp检测流程

  -宿主细胞蛋白（host cell protein，HCP）是一类异质性的蛋白污染，是生物制品中无法避免的一类杂质，可能在重组发酵过程中产生，或是从外源物质引入。即使进行多次复杂的分离纯化，HCP也可能与产品共同纯化，或随产品而分离，因此需要对原料产品和下游纯化过程（DSP）中间体中的HCP

• • HCP定量质谱

  -当前已开发出多种互补的分析用于监测宿主细胞蛋白（HCP），包括1D/2D-PAGE、基于质谱（MS）的分析技术等。如通过二维液质联用（2D-LC-MS）识别潜在的残留HCP，可以开发出基于目标的多反应监测（MRM）-LC-MS的方法来量化原液中的多个HCP。