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氨基酸组成分析是蛋白及其多肽研究的基础内容之一,通过氨基酸组成分析可初步了解蛋白多肽链的氨基酸组成结构,并进一步解析蛋白结构及其生理功能。蛋白样品通常需要经过酸水解破坏氨基酸残基间的共价肽键,将蛋白质、多肽等氨基酸链水解为单个氨基酸,水解后的氨基酸分子一般不包含发色基团,分子吸收系数低,不能
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TMT标记的化学结构由报告基团、平衡基团和肽反应基团组成,其本质是2种、6种、10种或16种相对分子质量均等量的异位标签,这些异位标签最多可含有16种不同相对分子量的报告基团和平衡基团,目前最多能做到16标的TMT(16-plex)。
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氨基酸序列重复片段是指蛋白氨基酸序列中的不同位置出现的相同或对称性氨基酸片段,这些氨基酸重复片段有着对应的相似的结构和单元,蛋白序列中的氨基酸重复片段对于研究蛋白质的结构、功能及其进化路径有着至关重要的作用。蛋白经过基于Edman降解或质谱法序列测定之后,所得到的蛋白氨基酸序列经过数据库检索
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TMT标记定量蛋白质组学可以表征生物系统中的全部蛋白质,目前已成为解决重要生物学问题的重要工具。该方法可对所有类型的蛋白质样品进行定量。
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多肽是由两个以上氨基酸脱水缩合组成的化合物分子,其结构与蛋白类似,肽段大小通常为6-50个氨基酸,在血压调节、免疫调节、葡萄糖糖代谢等生理活动中具有重要作用。通常采用质谱仪对多肽结构进行分析鉴定,其中串联质谱结合生物信息学分析是多肽结构分析的主流技术。
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TMT(Tandem Mass Tag)是Thermo公司研发的多肽体外标记定量技术,其采用多种等质量同位素标签与肽段氨基(包括氨基酸N端及赖氨酸侧链氨基)共价结合实现连接,再通过高精度质谱分析,可同时实现多达16组不同样本中蛋白的定性和定量分析。
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生物药是利用生物技术方法生产的药物制品,包括单克隆抗体(mAb)、治疗性蛋白质、融合蛋白质、抗体药物偶联物和其他类似的生物制剂。生物制药表征主要是用于了解生物制药材料的理化性质,其重点在于GMP和监管合规性。生物药表征包括氨基酸组成、氨基酸序列及氨基酸末端序列、巯基和二硫键、糖基化结构、生物
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TMT技术是由美国Thermo公司研发的一种化学标记技术,其采用同位素标签特异性标记酶解后获得的蛋白多肽N末端或赖氨酸侧链基团,之后使用质谱对蛋白进行相对定量检测。TMT定量蛋白质组学分析指采用TMT技术对细胞、组织或生物体中的所有蛋白质进行相对定量分析,是一种基于质谱分析的测定不同样品中蛋
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纯化的蛋白在进入质谱分析前,通常需要将纯化的蛋白样品经过蛋白酶的酶切消化为肽段混合物,再经过高效液相色谱对多肽片段进行初步分离,以进一步提升质谱检测的准确度。液相色谱不受蛋白样品挥发性、热稳定性及相对分子质量的限制,仅要求将蛋白样品制成溶液即可,在质谱分析前加了液相色谱分离这一步骤,可使得纯
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蛋白的生理功能通常是通过蛋白与蛋白之间的相互作用来实现的,与靶向目标蛋白发生相互作用的蛋白称之为互作蛋白,互作蛋白的筛选是蛋白相互作用及其功能研究的基础。互作蛋白的筛选方法主要可分为体外(in vitro)和体内(in vivo)筛选,体外筛选包括Pull-down和蛋白质交联(cross
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