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单链抗体(scFv)是由抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)通过15~20个氨基酸的短肽(linker)连接而成的抗体,是一种人工合成的基因工程抗体,只有完整抗体的一条链。单链抗体测序是可通过基于质谱的从头测序(De novo)技术测定,其在不依赖于理论数据库情况下实现对抗体氨基酸序列
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蛋白N端测序方法主要包括质谱法和Edman降解法两类,基于质谱法和Edman降解法的蛋白N端测序样品其不涉及蛋白功能研究,不需要保持蛋白的活性;且要求样品中的蛋白纯度越高越好,Edman测序法测序要求蛋白纯度>95%。蛋白N端测序样品主要来源于从动物、植物或微生物中天然提取出的蛋白,合成多肽
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蛋白抗体全程测序即对抗体蛋白全长序列进行检测分析,其主要通过测定串联质谱检测中的相邻两片段离子之间的质量差异,从而确定抗体蛋白的氨基酸残基的质量及氨基酸序列信息。以此类推,通过沿着抗体蛋白主链逐一鉴定每个氨基酸残基,即可获得整个抗体蛋白的氨基酸序列。
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蛋白质序列分析是基于质谱或非质谱检测法对蛋白一级结构进行检测与分析,其检测流程是通过从蛋白样品中提取、富集到目标蛋白,之后使用特异性蛋白酶酶切,得到的混合肽段进入色谱分离和质谱检测分析。通常使用LC-MS/MS的方法检测获得肽段碎片的二级质谱图,解析谱图即可获得蛋白肽段的氨基酸残基信息,再使
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对于未知或不确定理论序列的蛋白,可以使用N端测序的途径提供确证的关键信息。蛋白质N端测序的方法主要可分为质谱法和非质谱法两类,非质谱法主要以经典的Edman降解法为主。质谱法测序是基于已知的质谱数据库进行检索匹配,其不能用于未知蛋白N端测序。因此,可通过Edman降解法来实现未知蛋白质N端测
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蛋白质序列分析是指对构成蛋白质一级结构的氨基酸残基进行鉴定,以及对氨基酸残基的排列顺序进行分析,常用的蛋白质序列分析方法主要包括质谱法和非质谱法(Edman降解法)两类。质谱法是目前使用最为广泛的一种蛋白质序列分析方法,基于质谱的蛋白质序列分析结合对应算法和生物信息学技术,可以实现蛋白的N/
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蛋白印迹(Western blot)是根据抗原和抗体特异性结合的特点,来检测复杂样本中蛋白是否表达以及表达的相对丰度的一种技术手段。Western blot只能用于粗略分析基因表达蛋白是否表达以及蛋白的相对表达含量,通常需要与质谱技术联合使用,来实现对样本中表达蛋白的准确定性分析和定量分析。
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肽段是由两个或多个游离氨基酸通过肽键共价结合而成的氨基酸链,其可细分为低聚肽段(含2-20个氨基酸)和多聚肽段(含20-50个氨基酸)。肽段常以激素、生长因子、神经递质等的形式在生物体内发挥重要最用,特别是多肽类药物所表现出的强有效性和良好的耐受性,使其作为药物研究的热点之一。
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基于质谱的自上而下(Top-down)和自下而上(Bottom-up)技术是蛋白组学研究常用的两种策略,两者在检测原理、样品处理、仪器要求和适用范围等方面存在较大差异。
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蛋白测序指的是对构成蛋白质一级结构的氨基酸残基序列进行分析,蛋白测序是解析生物体内的蛋白结构及其生物学功能的基础。多蛋白测序即同时对多个蛋白的氨基酸序列进行检测和分析,若蛋白样品中含有多个蛋白,可通过MS/MS或LC-MS/MS的方法实现多蛋白测序。对于混合样品中的多蛋白测序,在进入质谱检测
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