2D Blue Native/SDS-PAGE复合物分析中,marker用什么呢?
- 高分子量蛋白质Maker:可以使用商业化高分子量蛋白质Maker,如NativeMark™ Unstained Protein Standard(Thermo Fisher Scientific)等。这些Maker包含几个不同大小的蛋白质复合物,可用于估计未知样品中复合物的分子量。
- 预染蛋白质分子量标记物:如PageRuler™ Plus Prestained Protein Ladder(Thermo Fisher Scientific),包含一系列预染色的标准蛋白质,分子量覆盖范围广,可以直观地观察到电泳过程和转移效果。
在2D Blue Native/SDS-PAGE复合物分析中,首先通过Blue Native PAGE (BN-PAGE) 分离蛋白质复合物,然后在第二维使用SDS-PAGE分离复合物中的单个蛋白质。因此,可能需要两种类型的标记物:一种用于BN-PAGE,另一种用于SDS-PAGE。
1. BN-PAGE标记物
对于BN-PAGE,标记物应该是已知大小的蛋白质复合物,因为第一维的分离基于复合物的大小和形状。例如:
2. SDS-PAGE标记物
对于第二维的SDS-PAGE,标记物应该是已知大小的单个蛋白质,因为SDS-PAGE基于蛋白质的分子量进行分离。例如:
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