SUMO内源性的Coip应该怎么做呢
SUMO（Small Ubiquitin-like Modifier）内源性的Co-Immunoprecipitation（Co-IP）实验通常遵循以下步骤：
1.细胞裂解：
首先需要收集细胞。对于SUMO化研究，通常使用瞬时转染的细胞，或者特定条件下处理的细胞，以增加SUMO化蛋白的水平。
2.制备裂解液：
使用包含蛋白酶抑制剂和SUMOylation抑制剂（如N-乙基马来酰亚胺，NEM）的裂解液。NEM用于抑制去SUMO化酶，保护SUMO化修饰。
3.裂解细胞：
将收集的细胞在裂解液中裂解。这一步骤通常在低温下进行，以防止蛋白质降解和去SUMO化。
4.离心：
将裂解的细胞上清通过离心分离，以去除细胞碎片。
5.预清理：
对上清液进行预清理，去除非特异性结合的蛋白，通常使用A/G珠或对应的对照抗体。
6.添加抗体：
向预清理后的上清液中加入针对目标蛋白的特异性抗体，使之与SUMO化蛋白结合。有时也可直接使用针对SUMO的抗体进行免疫沉淀。
7.孵育：
将混合物在低温下过夜孵育，以促进抗体与目标蛋白的结合。
8.捕获免疫复合物：
添加蛋白A/G珠，以捕获抗体-蛋白复合物。
9.洗涤：
通过多次洗涤去除非特异性结合的蛋白。
10.洗脱：
使用SDS-PAGE加载缓冲液洗脱免疫复合物。
11.蛋白质电泳：
将洗脱的样品在SDS-PAGE上进行电泳。
12.蛋白质印迹（Western Blot）：
将电泳后的蛋白转移到膜上，并使用特异性抗体检测目标蛋白或其SUMO化形式。
在进行SUMO内源性Co-IP实验时，重要的是要确保使用合适的缓冲液和条件，以保护SUMO化状态，并减少蛋白质的降解和去SUMO化。此外，实验的优化和对照实验也是非常关键的步骤。
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