SDS-PAGE蛋白质纯度分析：请问怎么分析纯度啊

SDS-PAGE（Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种常用的蛋白质分析方法，通过比较蛋白质的相对迁移距离，可以对蛋白质的大小进行分析。通过观察凝胶上的条带数量和强度，可以大致评估蛋白纯度。利用SDS-PAGE评估蛋白质纯度的基本步骤如下：

1.聚丙烯酰胺凝胶制备：

制备适当浓度的聚丙烯酰胺凝胶，浓度通常根据蛋白质大小选定。对于大多数应用来说，8-15%的浓度适用于大多数蛋白质。对于更高分辨率的应用，可以使用梯度凝胶。

2.加样：

将处理过的蛋白样品装载到凝胶的样品孔中。同时，也要装载一个分子量标准（分子量对照），以便后续分析蛋白质大小。

3.电泳：

在一定的电压下进行电泳，使蛋白质在凝胶中沿着电场方向迁移。电泳时间取决于凝胶浓度、电压和蛋白质大小。

4.染色和脱色：

电泳完成后，将凝胶染色，通常使用考马斯亮蓝或银染等方法。然后进行脱色处理，去除多余的染料，以便观察到清晰的蛋白条带。

5.结果分析：

观察凝胶上的蛋白条带，评估蛋白纯度。理想情况下，纯蛋白应该只出现一个明显的条带。如果有多个条带，说明蛋白存在杂质，可以使用图像分析软件对条带的强度进行定量分析，以评估目标蛋白的纯度。

需要注意的是，SDS-PAGE分析的纯度计算只是一种定性或半定量方法，用于快速评估蛋白质样品的纯度。对于更精确的纯度评估，可以考虑使用高效液相色谱（HPLC）等方法。

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